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1、 本研究主要包括以下三個(gè)方面的內(nèi)容: 一、SARS-CoVN蛋白單克隆抗體的制備及其性質(zhì)分析。我們用基因重組SARS-CoVN蛋白免疫BALB/c小鼠,采用雜交瘤技術(shù),用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞,制備單克隆抗體。通過(guò)免疫雙向擴(kuò)散、間接ELISA、間接免疫熒光、和WesternBlot等方法鑒定抗體的特性。融合后共挑出576個(gè)克隆,得到抗基因重組SARS-CoVN蛋白單克隆抗體19個(gè),陽(yáng)性克隆率為3.3%。19株單抗中有
2、15株能穩(wěn)定分泌抗體,其中10株與滅活的SARS-CoV(北京GBI生物技術(shù)有限公司試劑盒)呈陽(yáng)性反應(yīng)。該10株單抗的相對(duì)親和力在1.1×108~8.9×109M-1之間。10株中有1株為IgG2b、1株為IgG3,其余均為IgG1。10株單抗中有8株與12種肺炎相關(guān)的病原體無(wú)交叉反應(yīng),1株與甲型、乙型流感病毒,副流感病毒有交叉反應(yīng),1株與甲型、乙型流感病毒有交叉反應(yīng)。最終得到8株特異性好、親和性高且與其它相關(guān)病原體無(wú)交叉反應(yīng)的單克隆抗
3、體?! 《?、SARS-CoVS蛋白單克隆抗體的制備。 三、用抗SARS-CoVN蛋白單克隆抗體初步建立檢測(cè)SARS-CoV的雙抗體夾心ELISA方法。 本文采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基制備抗SARS-CoVN、S蛋白的單克隆抗體,成功獲得了抗SARS-CoVN蛋白的單抗,并建立了檢測(cè)SARS-CoV的雙抗體夾心ELISA方法。本研究所制備的單克隆抗體可以為SARS-CoV的基礎(chǔ)與臨床研究提供有力的工具,建立的雙抗體夾心ELISA
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