IL-17和Nogo-A IgM抗體在多發(fā)性硬化中的作用研究.pdf

1、目的:
　　多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是一種病因未明的，中青年易發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS)炎性脫髓鞘性自身免疫性疾病，主要以中樞神經(jīng)系統(tǒng)多發(fā)性白質和皮質下病灶所導致的復發(fā)和進展性神經(jīng)癥狀為特征。病理特點為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)血管周圍的淋巴/單核細胞浸潤，脫髓鞘斑塊形成，反應性膠質疤痕形成和軸突損傷。MS臨床表現(xiàn)復雜多樣，不同患者和患者不同時期臨床過程和表現(xiàn)有很大

2、的差異。由于MS病因和發(fā)病機制尚未完全清楚，目前無特效性治療。隨著細胞生物學的發(fā)展，基因技術的應用，深入研究多發(fā)性硬化的發(fā)病機制，探討有價值的生物標記進而尋找有效的診斷和治療手段顯得尤為迫切和重要，也是目前神經(jīng)免疫領域里的重要課題。
　　目前認為，多發(fā)性硬化是在易感基因的基礎上，受環(huán)境因素的觸發(fā)由CD4+T細胞介導的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性疾病。Th1/Th2的平衡介導MS的嚴重程度及其進展。2005年3月LangrishCL等人

3、報道了新發(fā)現(xiàn)的一類輔助性T細胞亞群在誘發(fā)EAE中起核心作用，其通過IL-23誘導產(chǎn)生的以分泌IL-17、IL-17F、TNF、IL-6等促炎癥細胞因子為特征的CD4+T細胞的分化。這群輔助性T細胞具有高度的致病性，對EAE的誘導和維持起關鍵的作用的細胞亞群被命名為Th17細胞。Th17分泌的特征性細胞因子IL-17是一種促炎癥細胞因子，能夠與多種細胞因子如TNF-α和IFN-γ等產(chǎn)生協(xié)同作用以放大炎癥反應。已有研究表明，在多發(fā)性硬化病人

4、的腦組織、血的單核細胞以及腦脊液中IL-17mRNA及蛋白的表達均明顯升高，進一步說明IL-17在MS的發(fā)病階段起重要作用。
　　自身抗體反映了自身免疫反應的表型、本質和強度?？梢宰鳛镸S與其它免疫介導性疾病的診斷、分類、疾病活動性和預測臨床進程的潛在的標記物。在MS病理機制中抗體在免疫病理反應（脫髓鞘）的不同階段、促進修復（如髓鞘再生）和自身免疫反應的平衡等各個方面均有不同的生物學功能。Nogo被認為是神經(jīng)生長抑制劑，是一種由R

5、TN4基因編碼的蛋白，在體外重組Nogo蛋白抑制軸突的生長。Nogo-A與MAG和MOG一樣是髓磷脂成分之一，發(fā)現(xiàn)其抑制神經(jīng)元的生長，預示著在MS中髓鞘破壞的產(chǎn)物抑制了軸突再生。近期發(fā)現(xiàn)，可溶性Nogo-A在MS急性期腦脊液中被發(fā)現(xiàn)，但在緩解期無表達，預示著在MS的急性期Nogo-A特異性的向腦脊液中擴散。
　　目前的研究已提示IL-17和Nogo-AIgM抗體在自身免疫性疾病的產(chǎn)生和維持中起著至關重要的作用。因此本課題以多發(fā)性硬

6、化為研究對象，探討IL-17和Nogo-AIgM抗體在復發(fā)期急性階段多發(fā)性硬化患者外周血清中表達情況，探討二者與MS發(fā)病機制是否相關，應用統(tǒng)計學方法評價IL-17和Nogo-AIgM抗體在MS的表達。以期發(fā)現(xiàn)IL-17與Nogo-AIgM抗體在疾病發(fā)展可能機制，為多發(fā)性硬化的診斷和治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　收集2011年12月～2013年06月中國醫(yī)科大學附屬一院神經(jīng)內(nèi)科經(jīng)內(nèi)科就診MS患者共29例，臨床入選標準:依

7、據(jù)McDonald多發(fā)性硬化診斷標準（2010年修訂版）為臨床確診的MS患者，全部處于急性發(fā)作期。對29例MS患者進行空腹采肘靜脈血(5ml)，置于EDTA抗凝管中，放4℃冰箱2h左右分層;3000r/min離心5min，流取上清液。同時隨機選取25例健康志愿者作為對照組，進行空腹采肘靜脈血，留存血樣。
　　帶血樣收集完畢，采用雙抗體夾心法ELISA試劑盒（上海洋紡生物技術公司）檢測外周靜脈血分離所得血漿中IL-17、Nogo-A

8、IgM抗體的水平。通過對比MS組與健康組血清中IL-17、Nogo-AIgM的表達水平，為揭示MS發(fā)病機制提供了研究方向。
　　結果:
　　1、MS組患者血清IL-17的水平為(15.496±4.403)pg/ml，對照組IL-17水平為(6.049±0.481)pg/mL;MS組與對照組差異有顯著性意義(p＜0.05)。
　　2、MS組患者血清Nogo-AIgM抗體的水平為(17.759±5.0906)pg/mL，對

9、照組Nogo-AIgM抗體水平為(7.4846±3.15632)pg/mL，MS組與對照組有顯著性差異(p＜0.05)。
　　3、IL-17和Nogo-AIgM抗體變化呈線性趨勢，總體趨勢來看，血清IL-17濃度越高，NogoAIgM抗體濃度也升高，進而應用spss19.0軟件，采用偏相關分析方法，發(fā)現(xiàn)MS患者血清IL-17和Nogo-AIgM抗體之間的偏相關系數(shù)r=0.480，具有統(tǒng)計學意義(p=0.008)，二者呈中度正相關。

10、
　　結論:
　　1.MS組與對照組比較，MS組血清IL-17表達水平遠高于對照組，血清中IL-17表達水平與MS發(fā)病情況正相關;
　　2.MS組與對照組比較，MS組血清Nogo-AIgM抗體表達水平遠高于對照組，血清中Nogo-AIgM抗體表達水平與MS發(fā)病情況正相關;
　　3.IL-17和Nogo-AIgM抗體呈線性趨勢，采用偏相關分析方法，MS患者血清IL-17和Nogo-AIgM抗體之間的偏相關系數(shù)r=0