門冬胰島素結(jié)晶工藝的研究.pdf

1、目的:
　?、賹?duì)門冬胰島素原料藥生產(chǎn)過程中的蛋白結(jié)晶工藝進(jìn)行研究,確定結(jié)晶的制備工藝,為生產(chǎn)提供成熟穩(wěn)定的工藝路線。
　?、谑归T冬胰島素成品以晶體的形式保存和運(yùn)輸,降低門冬胰島素原料在儲(chǔ)運(yùn)過程中質(zhì)量變化的風(fēng)險(xiǎn),提高產(chǎn)品的穩(wěn)定性,減少生產(chǎn)過程中的損失,為制劑提供穩(wěn)定的原料藥產(chǎn)品,保證為患者提供安全,有效的產(chǎn)品。
　　方法:
　?、俚鞍捉Y(jié)晶:室溫(23℃)下,用注射用水配制含3.0~10.0 g/L門冬胰島素的結(jié)晶液

2、,加入結(jié)晶物質(zhì),使其含0.2~1.5 M甘氨酸、體積分?jǐn)?shù)為10~30％的有機(jī)溶劑、體積分?jǐn)?shù)為0.2~0.4%的酚類物質(zhì)和0.2~0.5 M鹽類物質(zhì),調(diào)節(jié)結(jié)晶液pH6.0~6.5,加入鋅離子(鋅離子與門冬胰島素的摩爾比),室溫下結(jié)晶3~6小時(shí)后降溫至2~8℃,靜置12~18 h后析出蛋白晶體。
　?、诰w與結(jié)晶液固液分離及洗滌:結(jié)晶后抽去結(jié)晶體系上清母液,加入等體積20%乙醇攪拌洗滌,靜置一定時(shí)間后,抽去或傾倒出上清液,重復(fù)以上操作

3、2-4次,最后將晶體凍干成粉末。
　?、郯凑账幍浞€(wěn)定性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)晶粉進(jìn)行影響因素試驗(yàn)和加速試驗(yàn)。
　　④參照中國藥典2010年版二部附錄Ⅶ G胰島素生物測(cè)定法對(duì)門冬胰島素進(jìn)行生物活性測(cè)定。
　　結(jié)果:
　?、偻ㄟ^上述實(shí)驗(yàn)摸索出了一套門冬胰島素原料藥的結(jié)晶工藝條件參數(shù),并成功得到蛋白晶體。
　?、谕ㄟ^顯微鏡觀察,可見晶型均一性好,形狀規(guī)則的晶體。通過超高效液相色譜儀(HPLC)檢測(cè),穩(wěn)定性試驗(yàn)各項(xiàng)結(jié)果符合藥