雙時(shí)相門冬胰島素40注射液的研制及其生物學(xué)活性研究.pdf

1、目的：研制雙時(shí)相門冬胰島素40注射液；初步探討雙時(shí)相門冬胰島素40注射液對(duì)T1DM大鼠血糖影響及其免疫調(diào)節(jié)作用。
　　方法：（1）通過處方研究和工藝開發(fā)研制出雙時(shí)相門冬胰島素40注射液，并對(duì)其制劑質(zhì)量進(jìn)行研究；（2）取I型糖尿病模型大鼠注射門冬40注射液，每日一次，連續(xù)干預(yù)6周；實(shí)驗(yàn)期間觀察各組大鼠的一般狀況，監(jiān)測(cè)大鼠的體重、飲水量、排尿量、攝食量及空腹血糖；（3）在給藥前、給藥3周、給藥6周，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠外周血CD4+

2、CD25+Treg細(xì)胞的變化，采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清IFN-γ、IL-10、TGF-β細(xì)胞因子的水平；給藥6周后采用RT-PCR法檢測(cè)大鼠外周血淋巴細(xì)胞Foxp3 mRNA的水平，HE染色法觀察各組大鼠胰腺組織病理變化。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組。
　　結(jié)果：（1）研制出的門冬胰島素40注射液按藥典和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，制劑穩(wěn)定性良好；（2）實(shí)驗(yàn)組大鼠一般狀況：實(shí)驗(yàn)組大鼠一般狀況良好，“三多一少

3、”典型癥狀改善明顯，體重呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，在第6周(258.4g)明顯高于模型組大鼠(154.3g)(P<0.05)；胰腺組織HE染色結(jié)果顯示，給予藥物6周后，實(shí)驗(yàn)組大鼠胰島組織相對(duì)較好，比正常的胰腺組織差，但比模型組好,與藥物對(duì)照組相比，無明顯差異；治療7天后，實(shí)驗(yàn)組大鼠血糖(7.75mmol/L)顯著低于模型組(24.93mmol/L)，第21天、42天實(shí)驗(yàn)組顯著低于模型組(P<0.05)。（3）CD4+CD25+Treg細(xì)胞流式細(xì)胞

4、術(shù)檢測(cè)結(jié)果：藥物干預(yù)6周后，實(shí)驗(yàn)組Treg細(xì)胞(1.84％)高于模型組(1.46%)具有明顯差異性(P<0.05)，低于正常組(2.23%)有明顯差異性(P<0.05)。（4）Foxp3 mRNA相對(duì)定量統(tǒng)計(jì)結(jié)果：給與藥物治療6周后，實(shí)驗(yàn)組(3.2368)明顯高于正常組(P<0.05)，明顯低于模型組(6.7928)(P<0.05)。（5）細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果：①給藥6周后，實(shí)驗(yàn)組INF-γ含量(111.87pg/ml)比給藥前低(140.

5、04pg/ml)，明顯低于模型組INF-γ含量(185.90pg/ml)(P<0.05)；②給藥6周后，實(shí)驗(yàn)組IL-10含量(1.45ng/ml)比給藥前高(1.15ng/ml)，高于模型組IL-10含量(0.93ng/ml)(P<0.05)；③給藥6周后，實(shí)驗(yàn)組TGF-β含量(114.21pg/ml)比給藥前高(97.19pg/ml)，高于模型組TGF-β含量(79.13pg/ml)(P<0.05)。
　　結(jié)論：（1）采用本方法