一氧化氮對(duì)懸浮紅細(xì)胞保存質(zhì)量影響及糖酵解代謝關(guān)系的研究.pdf

1、紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)輸注效果與紅細(xì)胞保存質(zhì)量有著密切的關(guān)系。針對(duì)紅細(xì)胞保存質(zhì)量難以再提高的問(wèn)題，有研究結(jié)果顯示，給保存期長(zhǎng)的紅細(xì)胞補(bǔ)充一氧化氮(nitric oxide，NO)可以明顯改善紅細(xì)胞的變形性及輸注后效果。
　　本實(shí)驗(yàn)室在前期研究的基礎(chǔ)上，推測(cè)NO可能通過(guò)某些特定細(xì)胞群的作用來(lái)提高整體紅細(xì)胞保存質(zhì)量。
　　目的:研究外源性NO藥物供體硝普鈉（sodium nitroprusside，SNP

2、）和前體L-精氨酸(L-arginie，L-arg)對(duì)紅細(xì)胞不同保存時(shí)期質(zhì)量的影響，且探究NO與紅細(xì)胞糖酵解代謝的關(guān)系以此來(lái)闡明NO作用于紅細(xì)胞的部分機(jī)理。
　　方法:密度梯度離心法分離已孵育1h不同濃度的SNP和L-arg的紅細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)紅細(xì)胞變形性和滲透脆性來(lái)分別確立SNP和L-arg的最佳添加濃度。在不同保存時(shí)期添加最佳濃度的NO的紅細(xì)胞經(jīng)密度梯度分離后，檢測(cè)分層后各層紅細(xì)胞數(shù)目比例、丙酮酸激酶、變形性、滲透脆性等指標(biāo)。D

3、.L甘油醛(D.L glyceraldehyde，DL-GA)是目前公認(rèn)的最理想的糖酵解抑制劑，它能特異性抑制丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)和己糖激酶(hexokinase，HK)活性從而達(dá)到抗糖酵解的目的。將保存末期的紅細(xì)胞內(nèi)分為6組，1組為對(duì)照組，2組為D.L甘油醛，3組為SNP，4組為D.L甘油醛加SNP，5組為L(zhǎng)-arg，6組為D.L甘油醛加L-arg，孵育2h后密度梯度分離后洗滌2次所得的各層紅細(xì)胞及未分層

4、紅細(xì)胞，分別檢測(cè)變形性、PK、HK活性。
　　結(jié)果:保存初期和中期的紅細(xì)胞在添加10μM的SNP或L-arg后，其變形性和滲透脆性改善效果明顯，末期最佳濃度則為100μM。保存末期的紅細(xì)胞數(shù)目比例在加入NO后2，3層紅細(xì)胞增加，各層紅細(xì)胞的天齡也在加入NO后有明顯降低，其他指標(biāo)均發(fā)現(xiàn)第4層細(xì)胞和保存末期紅細(xì)胞在加入NO后有明顯改善，其他紅細(xì)胞沒(méi)有明顯的改變或規(guī)律性。保存末期的SNP或L-arg能明顯提高各層紅細(xì)胞的變形性、PK和H