副粘病毒Tianjin株缺損性干擾顆粒用作新型生物佐劑的初步研究.pdf

1、目的:新型疫苗如基因工程多肽或亞單位疫苗和合成肽疫苗等的弱免疫原性使得佐劑在疫苗研制中的應(yīng)用越來越廣泛，并隨著疫苗推廣應(yīng)用到其他領(lǐng)域如抗感染，抗腫瘤的輔助治療。因此尋求理想的佐劑對于疫苗的研制發(fā)展有著關(guān)鍵性的意義。常見的佐劑有不溶性鋁鹽類膠體、油水乳劑、微生物及其代謝產(chǎn)物、核酸及其類似物、細(xì)胞因子、免疫刺激復(fù)合物、蜂膠、脂質(zhì)體等。缺損性干擾(defective interfering, DI)顆粒是一種含有部分基因組的病毒顆粒，它是病毒

2、在復(fù)制過程中發(fā)生錯誤而出現(xiàn)的，其基因組只是亞基因組片段。其自身屬性決定其亞基因組中攜帶了眾多正常病毒顆粒所沒有的信息。研究發(fā)現(xiàn)仙臺病毒DI顆粒具有強(qiáng)大的刺激樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)成熟的能力。副粘病毒Tianjin株(Paramyxovirus，Tianjin Strain)是1999年從天津醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心爆發(fā)急性上呼吸道感染的普通棉耳狨猴肺臟中分離出來的毒株，經(jīng)鑒定屬于副粘病毒科、副粘病毒亞科、呼吸道病毒

3、屬，與仙臺病毒(Sendai virus，SeV)親緣關(guān)系最近，不屬于仙臺病毒現(xiàn)有的3個進(jìn)化分支而自成獨(dú)立的一支。因此本文對副粘病毒Tianjin株DI顆粒作為新型生物佐劑的可行性進(jìn)行了初步研究。
　　 方法:將副粘病毒Tianin株用雞胚培養(yǎng)法連續(xù)傳代三次，鋪設(shè)5％～45％蔗糖密度梯度超速離心分離提純副粘病毒Tianjn株DI顆粒，通過電鏡觀察，體外接種敏感細(xì)胞系大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6株觀察細(xì)胞病變，接種雞胚收集尿囊液檢測血凝素

4、效價等對DI顆粒進(jìn)行了鑒定，將脊髓灰質(zhì)炎病毒(PV)疫苗株的滅活抗原與DI顆粒佐劑等量混合后制備疫苗。選取4周齡ICR小鼠，經(jīng)皮下多點(diǎn)注射對小鼠進(jìn)行免疫，觀察小鼠的大體情況和免疫應(yīng)答水平。并設(shè)PV滅活抗原加氫氧化鋁凝膠佐劑組為陽性對照，PV滅活抗原無佐劑組以及生理鹽水組為陰性對照。觀察小鼠的存活情況;于免疫后兩周摘眼球取血分離血清，檢測免疫血清中PV特異性抗體;無菌取脾臟分離脾淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，分別用MTT法進(jìn)行T、B淋巴細(xì)胞增殖試

5、驗(yàn);檢測脾淋巴細(xì)胞接受PV滅活抗原再次刺激后IFN-γ、IL-4的產(chǎn)生情況，對DI顆粒能否增強(qiáng)PV免疫小鼠的免疫應(yīng)答以及免疫應(yīng)答的類型進(jìn)行評估。
　　 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定純化分離出的是與完整病毒有所差別的，無復(fù)制能力的缺損性顆粒成分。動物免疫指標(biāo)結(jié)果顯示副粘病毒Tianjin株DI顆粒佐劑組血清特異性PV抗體水平高于陰性對照組，但低于陽性對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)（SI)，脾淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ的量高于其他組