仙臺病毒缺損干擾顆粒抗大鼠腦膠質(zhì)瘤初步研究.pdf

1、目的:鑒于仙臺病毒Tianjin株對成年人的低致病性，以及先前的實驗表明仙臺病毒其它基因型對腫瘤有抑制作用。本課題擬通過仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆粒對腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)影響，探索不必外源基因的表達載體和不必具有直接溶瘤能力的病毒，利用仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆粒輔助治療腫瘤的方法。并且初步研究其治療腫瘤的機理，以期為腫瘤治療提供新的思路。
　　方法:1.敏感細(xì)胞的篩選:向所選定的癌細(xì)胞株:A549、MEL526、Li

2、br、C6、HT29、SW480、A498接種活仙臺病毒Tianjin株，通過細(xì)胞CPE、細(xì)胞成活率、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞培養(yǎng)液TCID50、PCR等形態(tài)學(xué)、生物學(xué)和分子生物學(xué)方法確定對該病毒敏感的細(xì)胞系。2.仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆粒的制備:仙臺病毒Tianjin株通過雞胚培養(yǎng)法擴增，超速離心純化仙臺病毒Tianjin株活病毒，超速離心蔗糖密度梯度分離缺損干擾顆粒，提純出的缺損干擾顆粒使用雞胚培養(yǎng)法驗證是否能夠繼續(xù)增殖，如果不能增

3、殖則為仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆粒。3.使用仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆粒按不同濃度接種DC細(xì)胞，檢測DC細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、TNF-α、IFN-α等有抗腫瘤作用的細(xì)胞因子的量，驗證仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆粒刺激DC細(xì)胞抗腫瘤的能力。4.使用確定出的敏感細(xì)胞系接種適宜的動物，制作荷瘤動物模型。腫瘤內(nèi)接種仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆粒，通過直接測量腫瘤大小、細(xì)胞因子檢測、PCR、免疫組化等方法評估仙臺病毒Tia

4、njin株缺損干擾顆粒治療腫瘤的可行性，并初步確定治療的機理。
　　結(jié)果:大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6株對仙臺病毒Tianjin株最具高度敏感性，病毒TCID50達到11.24±0.08.其它被測試細(xì)胞株均未達到此值，一般在0～3之間。由此確定實驗動物為大鼠，品種為Wistar大鼠。在促進DC細(xì)胞體外增值實驗中，與對照組比較，仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆?？梢源碳C細(xì)胞產(chǎn)生抗癌作用的細(xì)胞因子，IL-6、TNF-α、IFN-α有明顯

5、升高（均為P＜0.001）。在大鼠體內(nèi)實驗中，與對照組比較，仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆粒可以刺激正常大鼠高表達有抗癌作用的細(xì)胞因子，IL-6、TNF-α、IFN-α有明顯升高（均為P＜0.001）。大鼠腦瘤模型造模失敗。
　　結(jié)論:大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6株對仙臺病毒Tianjin株高度敏感。仙臺病毒Tianjin株接種C6細(xì)胞后可引起細(xì)胞明顯病變，促進凋亡，并且作用持續(xù)。仙臺病毒Tianjin株缺損干擾顆?？梢源龠M樹突細(xì)胞成