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文檔簡(jiǎn)介
1、在本實(shí)驗(yàn)中，來自釀酒酵母HS1185的胞外β-1，3-葡聚糖基因被插入TA克隆載體pMD-18中，并被轉(zhuǎn)入大腸桿菌JM109中。重組質(zhì)粒命名為pMDT-18-GLU。通過Xho I和Nco I雙酶切質(zhì)粒pMDT-18-GLU獲得的β-1，3-葡聚糖基因片段插入pET22b(+)的Xho I和Nco I酶切位點(diǎn)。此重組質(zhì)粒命名為pET22b/GLU。質(zhì)粒pET22b-GLU被轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)，通過菌落PCR篩選出陽性克隆。
2、 提取出來已經(jīng)插入β-1，3-葡聚糖基因的pET22b-GLU質(zhì)粒和pET22b(+)通過PCR擴(kuò)增和限制性內(nèi)切酶驗(yàn)證分析。PCR質(zhì)粒pET22b-GLU擴(kuò)增出1337 bp的條帶，與釀酒酵母中β-1，3-葡聚糖基因大小一致。在酶切驗(yàn)證中，重組質(zhì)粒pET22b/GLU被Xho I和Nco I雙酶切，得到了5431 bp和1337 bp的兩條帶，分別為pET22b(+)和β-1，3-葡聚糖基因。最后通過測(cè)序來進(jìn)一步驗(yàn)證正確的基因序列
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