GENE EXPRESSION ANALYSIS AND cDNA CLONING OF CHITINASE 5 AND 10 OF WHITE BACKED PLANTHOPPER,SOGATELLA FURCIFERA(HORVATH).pdf

1、白背飛虱通過吸食水稻植株的汁液并且在植物組織上產(chǎn)卵，已經(jīng)逐漸上升為水稻上的主要害蟲。當(dāng)面對人口的增長和氣候變化等這些嚴肅問題的時候，白背飛虱造成的危害已經(jīng)很大程度上影響到很多國家的糧食產(chǎn)量和安全性。由于大多數(shù)害蟲都能通過進化來適應(yīng)和抵御新的害蟲防治策略，這種特性對于病蟲害的控制非常重要。幾丁質(zhì)酶作為潛在的害蟲控制靶標(biāo)吸引了越來越多的關(guān)注。通過破壞幾丁質(zhì)酶的合成來抑制害蟲的生長和發(fā)育是一種新的防治策略。在本文中我們克隆得到了兩個幾丁質(zhì)酶基

2、因（Cht5和Cht10），并對其進行了表達量分析和進化分析。
　　RT-PCR驗證兩個基因：
　　從白背飛虱的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中得到了選擇了cht5和cht10兩個基因的序列做進一步的分析。通過RT-PCR進行了驗證。Blastx注釋表明這兩條序列屬于GH18幾丁質(zhì)家族。在同源比對分析中，Cht-10序列與赤擬谷盜的Cht-10序列的相似性最高，為74％;Cht-5序列與Cht-5前體序列的相似性最高，為82％。
　　在不

3、同發(fā)育階段中對這兩個基因表達模式的分析：
　　選擇了兩個基因（cht-5和cht-10）做表達模式分析。分別選取1到5齡幼蟲和成蟲的雌、雄蟲用于測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這兩種幾丁質(zhì)基因的表達模式是相似的。與Cht-10在2、3齡幼蟲中的表達量相比，在4齡幼蟲的雌、雄蟲中Cht-10的表達量顯著下降;而在5齡幼蟲中顯著升高。這說明，Cht-10在5齡幼蟲發(fā)育中起到重要的作用。與2、3齡幼蟲期相比，5齡幼蟲時期的表達量是正常的，然而在4齡時顯

4、著下降，在5齡時期又明顯上升。5齡幼蟲期過后，Cht-5的表達水平又降低。Cht-5的表達顯示，5齡幼蟲期是表達量最高的時期。根據(jù)表達量分析，Cht-5比Cht-10具有更加重要的生物學(xué)功能。
　　進化分析：
　　從NCBI上得到21條Cht-5和Cht-10的核酸序列。用Blastp驗證過以后，再通過ORFinder翻譯成蛋白序列。用Mega5.10做進化樹，結(jié)果發(fā)現(xiàn)白背飛虱的Cht-5與金小蜂的的Cht-5具有很大的相似

5、性。來自金小蜂的Cht-5聚成一個小簇，其他的11條序列聚成另一個較大的簇，分別來自甘比亞按蚊、二化螟、玉米螟、云杉卷葉蛾、鳳蝶、小地老虎、金文細蛾、甘藍夜蛾、粘蟲、甜菜夜蛾、草地夜蛾。另外7條Cht-10序列聚為一簇，分別來自小菜蛾、弓背蟻、黃粉蟲、赤擬谷盜、庫蚊、松褐天牛和埃及伊蚊。進化樹分析顯示了序列之間的進化關(guān)系及這五個不同目的昆蟲之間的序列相似性。在Cht-5聚成的簇中，相似性最高和最低的序列分別來自于金小蜂(79％)和二化螟