乳酸菌β-葡萄糖苷酶菌株選育及其酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、B-葡萄糖苷酶屬于纖維素酶的一種，從被發(fā)現(xiàn)起就受到世界各國的重視。目前B-葡萄糖苷酶的應(yīng)用已經(jīng)擴(kuò)展到秸稈的酒精發(fā)酵、釋放果蔬中的香氣物質(zhì)和改善果汁的質(zhì)地等。B-葡萄糖苷酶還能水解大豆異黃酮糖苷轉(zhuǎn)化為苷元，近幾年，國內(nèi)針對(duì)B-葡萄糖苷酶水解大豆異黃酮糖苷進(jìn)行了大量深入的研究。 本實(shí)驗(yàn)首先以乳酸菌作為產(chǎn)酶的出發(fā)菌株，篩選出高產(chǎn)B-葡萄糖苷酶的乳酸菌菌株。利用Design Expert軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項(xiàng)回歸擬合，對(duì)葡萄糖濃度、

2、牛肉膏濃度、以及培養(yǎng)基初始pH對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行研究，得出產(chǎn)B-葡萄糖苷酶的最佳培養(yǎng)基條件為葡萄糖2.4％，牛肉膏2.3％，無水乙酸鈉0.5％，Tween80 0.05％。研究了溫度、接種量、裝樣量、初始pH對(duì)B-葡萄糖苷酶產(chǎn)量的影響，確定了最佳發(fā)酵條件：發(fā)酵溫度37℃，接種量10％，裝樣量350mL/500mL，初始pH為6.6。 B-葡萄糖苷酶粗酶液經(jīng)過硫酸銨鹽析、DEAE-52離子交換層析、Sephadex G-100凝膠過濾

3、方法分離純化后，比活力提高了約14倍，SDS-PAGE測得提純后的酶的相對(duì)分子量約為50kD。 在對(duì)B-葡萄糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)研究中得出該酶反應(yīng)最適作用溫度為40℃，在45℃以上穩(wěn)定性較差，在pH為5～7的范圍之間穩(wěn)定性較好，最適pH為6.0。此外還測定了金屬離子對(duì)酶活力的影響，發(fā)現(xiàn)金屬離子Hg<'2+>、Ag<'+>對(duì)B-葡萄糖苷酶有強(qiáng)烈的抑制作用，Mn<'2+>對(duì)該酶活力有一定的增強(qiáng)作用。 另外，本論文利用高效液相色譜