產(chǎn)柚苷酶菌株的選育及柚子汁酶法脫苦工藝的研究.pdf

1、柚苷酶是由黑曲霉、米曲霉、青霉等霉菌產(chǎn)生的胞外酶，能分解柚皮苷起到脫苦作用，在食品加工業(yè)上具有良好的應(yīng)用價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)前景。 在本實(shí)驗(yàn)中： 1.利用一種新的柚苷酶產(chǎn)生菌的篩選模型，即以桔皮粉為唯一碳源、氮源的平板，從堆積腐爛的柚子皮上篩選出一株柚苷酶生產(chǎn)菌株A13。對(duì)該菌株進(jìn)行搖瓶發(fā)酵其產(chǎn)酶水平達(dá)到365.31U/mL。通過(guò)形態(tài)特征初步鑒定其為黑曲霉(Aspergillus niger)。 2.以NTG對(duì)出發(fā)菌

2、株A-13進(jìn)行誘變，將誘變后的孢子涂在含納他霉素最低致死濃度(2.0μg/mL)的篩選平板上，獲得抗藥性突變株，結(jié)合透明圈和搖瓶復(fù)篩，從180個(gè)納他霉素抗性突變株中篩選得到1株搖瓶發(fā)酵產(chǎn)酶達(dá)876.43 U/mL的A-13-62號(hào)菌株，比出發(fā)菌株的產(chǎn)酶能力提高了近237％，該菌株經(jīng)數(shù)代培養(yǎng)后產(chǎn)酶穩(wěn)定。 3.從單因素水平試驗(yàn)和正交試驗(yàn)結(jié)果得出最佳搖瓶發(fā)酵條件和最佳培養(yǎng)基配方。發(fā)酵培養(yǎng)基配方：豆渣(含水30％～40％)100g，脫脂

3、豆餅粉40g，鼠李糖0.2g，CaCl21g，ZnSO41g，MgSO4·7H2O5g，K2HPO41g，蒸餾水1000mL；發(fā)酵條件為：培養(yǎng)溫度30℃、初始pH為5.0、接種量10％、500mL三角瓶裝液量為50mL，在此條件下發(fā)酵96h時(shí)產(chǎn)酶可達(dá)1017U/mL。 4.通過(guò)對(duì)A-13-62菌株所產(chǎn)柚苷酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)分析，其酶促反應(yīng)最適pH為4.0左右，最適溫度為60℃，Mg2+、Ca2+對(duì)柚苷酶有較強(qiáng)的抑制作用，而Zn2+對(duì)