鈍裂銀蓮花查尓酮合成酶基因核心片段的擴(kuò)增及分析.pdf

1、鈍裂銀蓮花(Anemone obtusiloba)是毛茛科(Ranunculaceae)毛茛亞科銀蓮花屬(Anemone L.)的一種多年生草本植物，其花色有黃色、淺黃色和白色三種。目前對鈍裂銀蓮花的研究主要集中在其藥用價值、性分配、繁殖分配、繁殖特征及資源分配、花部特征等方面，分子層面只有不同環(huán)境條件下鈍裂銀蓮花的ISSR遺傳多樣性分析的報道。本研究結(jié)合具體的研究條件，采用從鈍裂銀蓮花花瓣中提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行RT-PCR的方法

2、克隆鈍裂銀蓮花花色合成中的第一個關(guān)鍵酶查爾酮合成酶的核心片段，研究結(jié)果如下:
　　1.本實驗構(gòu)建了一種不用進(jìn)行RNA電泳即可驗證提取的RNA是否可以用于后續(xù)實驗的方法:設(shè)計一種骨架蛋白或組成蛋白的基因擴(kuò)增的引物，以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到的基因片段進(jìn)行測序，如果該序列為所設(shè)計基因的片段，則證明引物設(shè)計正確，然后再用該引物對所提取總RNA的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增，如果同樣可以得到該基因的序列，則證明提取到的總RNA及其反轉(zhuǎn)

3、錄產(chǎn)物純度較高，可用于RT-PCR反應(yīng);
　　2.本實驗通過設(shè)計肌動蛋白Actin基因的引物，以葉片基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到了Actin基因的序列片段，然后用該引物以花瓣提取的總RNA的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR，仍然得到了Actin的基因片段，并證明以DNA為模板的擴(kuò)增產(chǎn)物含有一段內(nèi)含子基因序列;
　　3.以設(shè)計的路線為基礎(chǔ)，根據(jù)GenBank中登錄的查爾酮合成酶(CHS)基因的序列，設(shè)計簡并引物，并對提取的