外源因素對(duì)紅松查爾酮合成酶基因表達(dá)和多酚含量的影響.pdf

1、紅松中富含有多種生物活性物質(zhì)，具有重要的科學(xué)研究和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。近些年來(lái)，紅松生物活性相關(guān)的研究工作不斷加強(qiáng)，但與活性物質(zhì)代謝相關(guān)的研究還處于起步階段。尤其是紅松中多酚代謝活動(dòng)相關(guān)研究還未完全開展。本課題研究了不同外源因素對(duì)紅松代謝活動(dòng)的影響，采用Folin-酚法測(cè)定紅松中多酚含量，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)CHS基因的表達(dá)量，使用雙向電泳技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究。主要取得如下成果：
　?。?）研究了不同外源因素對(duì)紅松

2、多酚含量的影響。使用Folin-酚法測(cè)定多酚含量。研究發(fā)現(xiàn)：紫外照射時(shí)間為4h時(shí)，紅松不定芽中多酚含量最，達(dá)到39.41mg/g；培養(yǎng)溫度為20℃時(shí)，紅松多酚含量最高，達(dá)到43.25mg/g，培養(yǎng)溫度為10℃時(shí)，多酚含量達(dá)最低值21.37mg/g；不同季節(jié)紅松松針多酚含量順序：秋季＞夏季＞冬季＞春季，秋季多酚含量為36.12mg/g，春季多酚含量為24.58mg/g。說(shuō)明紫外光照、培養(yǎng)溫度和季節(jié)都能對(duì)紅松多酚的含量造成影響。
　　

3、（2）研究了不同外源因素對(duì)查爾酮合成酶基因表達(dá)的影響。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)紅松中CHS基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，紫外、溫度和季節(jié)都能影響CHS基因的表達(dá)：以紫外照射0h的實(shí)驗(yàn)組為內(nèi)標(biāo)，紫外照射2h時(shí)，CHS基因的表達(dá)量達(dá)最高值，為內(nèi)標(biāo)的3.87倍，紫外照射8h時(shí)，CHS基因的表達(dá)量降低至內(nèi)標(biāo)的0.16倍；以培養(yǎng)溫度10℃的實(shí)驗(yàn)組為內(nèi)標(biāo)，培養(yǎng)溫度為20℃時(shí)，CHS基因的表達(dá)量最高，為內(nèi)標(biāo)的3.10倍；不同季節(jié)紅松松針CHS基因表達(dá)量順序?yàn)?/p>

4、：夏季＞秋季＞冬季＞春季，以春季實(shí)驗(yàn)組為內(nèi)標(biāo)，夏季的CHS基因的表達(dá)量為內(nèi)標(biāo)的3.03倍。通過(guò)紅松多酚含量和CHS基因表達(dá)量對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)基本變化規(guī)律：紅松多酚含量隨CHS基因的表達(dá)量升高而增加。
　　（3）研究了不同外源因素對(duì)紅松總蛋白表達(dá)的影響，通過(guò)雙向電泳技術(shù)分離鑒定紅松總蛋白。結(jié)果表明紫外光照、溫度和季節(jié)對(duì)蛋白表達(dá)量影響較大，還出現(xiàn)一些蛋白點(diǎn)的極端缺失。從各組中選取差異顯著蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI--TOF-MS分析：紫外實(shí)驗(yàn)