幾種香辛料提取物對常見食源性致病菌生物膜作用的研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）和副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是常見的食源性致病菌，都能影響食品的質(zhì)量安全，對人體健康造成威脅，嚴重的可引起死亡。生物膜（biofilm）是由微生物形成的被其自身分泌的胞外基質(zhì)所包裹的一類群體，這種特殊的結(jié)構(gòu)能夠抵御多種抗生素及抗菌劑的作用，從而有助于微生物自身的生存。但在醫(yī)療與食品安全領(lǐng)域，這種機制

2、則可能引起嚴重的感染風(fēng)險。而傳統(tǒng)的用抗生素、消毒劑等處理的策略，不僅效果有限而且容易使細菌產(chǎn)生耐藥性。因此開發(fā)出安全、高效、天然的抗生物膜的物質(zhì)則具有非常重要的意義。
　　本研究采用水提法和醇提法對10種天然香辛料(花椒、胡椒、丁香、肉桂、迷迭香、辣木葉、辣木莖、大蒜、洋蔥、小茴香)的抑菌物質(zhì)進行提取，在研究其抑菌能力的基礎(chǔ)上篩選出抑菌能力強的提取物，進一步通過結(jié)晶紫染色法、微量二倍肉湯稀釋法、XTT減低法、苯酚硫酸法以及激光共聚

3、焦掃描顯微鏡（CLSM）等方法來探究香辛料提取物對三種致病菌生物膜的抑制和清除作用。研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　1.針對10種香辛料的提取物，用牛津杯法測定其對三種致病菌的抑菌作用。結(jié)果表明：不同的香辛料對不同的菌種有不同的抑制效果，大蒜、肉桂、辣木葉、辣木莖、丁香等都表現(xiàn)出很強的抗菌作用，而花椒、胡椒、小茴香、迷迭香等則相對較弱，洋蔥的乙醇提取物和水提取物都沒有表現(xiàn)出抑菌作用?？傮w上乙醇提取物的抑菌效果要強于水提取物，副溶血弧菌對

4、香辛料的敏感性強于金黃色葡萄球菌和副溶血弧菌。
　　2.根據(jù)抑菌圈的大小，針對每種致病菌選取兩種抑菌效果最好的提取物并對其進行了復(fù)配，然后進行最小抑菌濃度（MIC）的測定。結(jié)果表明：所有的提取物對各自對應(yīng)菌的MIC都在6.25mg/mL與12.5 mg/mL之間；相同的提取物對不同的菌種，其MIC也有所不同，如大蒜對金黃色葡萄球菌的MIC為12.5 mg/mL，而對副溶血弧菌的MIC則為6.25 mg/mL，說明金黃色葡萄球菌對大

5、蒜的耐受性要強于副溶血弧菌；同時在復(fù)配實驗中，我們發(fā)現(xiàn)，所有的復(fù)配物的抑菌能力并沒有比單一提取物的強。
　　3.通過結(jié)晶紫染色法研究pH、溫度、時間以及營養(yǎng)水平等因素對生物膜形成的影響。結(jié)果表明：三種致病菌在一定的pH范圍，只要不是過酸或過堿的環(huán)境，都能形成生物膜，但相對來說它們都更適于偏堿性的環(huán)境；而溫度對生物膜形成的影響則更顯著，金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最適溫度為37℃，副溶血弧菌的最適溫度為30℃；時間對生物膜形成的影響也

6、比較顯著，而且三種致病菌的生物膜都在48 h后達到成熟；富營養(yǎng)水平能夠顯著增加生物膜的形成量。
　　4.根據(jù)篩選得到的香辛料提取物，分別研究其對三種致病菌生物膜形成的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：亞抑菌濃度的提取物都能夠?qū)ι锬さ男纬僧a(chǎn)生抑制作用，而且其還能抑制生物膜內(nèi)細菌的代謝活性，減少細菌胞外多糖的分泌。CLSM觀察發(fā)現(xiàn)，處理后死細胞的數(shù)量明顯增多，且生物膜的厚度明顯變小。
　　5.進一步研究高抑菌濃度的提取物對成熟生物膜的清除能力。