幾種常見(jiàn)致病菌的活的非可培養(yǎng)狀態(tài)研究.pdf

1、活的非可培養(yǎng)(Viable but nonculturable，VBNC)狀態(tài)作為微生物學(xué)的一個(gè)全新概念，近二十多年受到了微生物界的極大關(guān)注。但是對(duì)于VBNC狀態(tài)致病菌的復(fù)蘇情況、致病機(jī)制等方面的研究報(bào)道很少。本文對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌(Edwardsiella tarda)CW7、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)VIB799、FYZ8621.4、溶藻膠弧菌(Vibrio alginolyticus)VIB283、

2、鰻弧菌(Vibrio anguillarum)CW1、CW4幾種常見(jiàn)致病菌活的非可培養(yǎng)狀態(tài)的進(jìn)入、復(fù)蘇及進(jìn)入VBNC狀態(tài)后的形態(tài)變化、毒力情況進(jìn)行了研究。 用吖啶橙染色熒光顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(AODC)、活菌直接計(jì)數(shù)法(DVC)和涂布平板法(PC)研究這幾種致病菌能否進(jìn)入VBNC狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)，在低溫(4℃)寡營(yíng)養(yǎng)條件下，這幾種致病菌進(jìn)入VBNC狀態(tài)的時(shí)間分別為：遲緩愛(ài)德華氏菌CW7 28 d；副溶血弧菌VIB799和FYZ862

3、1.4分別為30 d和88 d；溶藻膠弧菌VIB283為90 d；鰻弧菌CW1和CW4分別為324 d和266 d。在實(shí)驗(yàn)期間，這幾種致病菌的存活曲線(xiàn)發(fā)生了相似的變化，當(dāng)實(shí)驗(yàn)菌株進(jìn)入VBNC狀態(tài)時(shí)，它們的總菌數(shù)與剛接種的濃度相比幾乎沒(méi)有太大變化，活菌數(shù)比總菌數(shù)低兩到三個(gè)數(shù)量級(jí)，并且穩(wěn)定在這一較低的水平，可培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)為零。 用熒光顯微鏡、掃描電鏡及流式細(xì)胞儀對(duì)這幾種致病菌的正常狀態(tài)、VBNC狀態(tài)及復(fù)蘇狀態(tài)進(jìn)行的研究表明，進(jìn)入VBN

4、C狀態(tài)后，這幾種菌在形態(tài)上發(fā)生了一致的變化，即都由原來(lái)的桿狀、短桿狀或弧狀變?yōu)榍驙?，并且體積比正常狀態(tài)的細(xì)胞明顯縮小；流式細(xì)胞儀研究還發(fā)現(xiàn)，復(fù)蘇狀態(tài)的副溶血弧菌VIB799及溶藻膠弧菌VIB283在形態(tài)上分別與其正常狀態(tài)幾乎沒(méi)有差異，復(fù)蘇狀態(tài)的遲緩愛(ài)德華氏菌CW7略小于正常狀態(tài)的遲緩愛(ài)德華氏菌CW7。 對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌CW7、副溶血弧菌VIB799、溶藻膠弧菌VIB283分別用升溫復(fù)蘇法、添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)升溫復(fù)蘇法及雞胚復(fù)蘇法進(jìn)行了

5、復(fù)蘇，研究發(fā)現(xiàn)采用添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)升溫復(fù)蘇法及雞胚復(fù)蘇法對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌CW7實(shí)現(xiàn)了復(fù)蘇，其復(fù)蘇時(shí)間分別是8 d和6 d；采用添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)升溫復(fù)蘇法對(duì)副溶血弧菌VIB799實(shí)現(xiàn)了復(fù)蘇，其復(fù)蘇時(shí)間為2 d；采用升溫復(fù)蘇法及添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)升溫復(fù)蘇法對(duì)溶藻膠弧菌VIB283實(shí)現(xiàn)了復(fù)蘇，其復(fù)蘇時(shí)間為8 d和16 h。將VBNC狀態(tài)及復(fù)蘇狀態(tài)的遲緩愛(ài)德華氏菌CW7注射大菱鲆進(jìn)行毒力測(cè)定發(fā)現(xiàn)，注射了VBNC狀態(tài)的遲緩愛(ài)德華氏菌CW7細(xì)胞的大菱鲆在實(shí)驗(yàn)期間

6、未出現(xiàn)發(fā)病或死亡現(xiàn)象，在這些大菱鲆體內(nèi)也沒(méi)有分離出遲緩愛(ài)德華氏菌CW7，而注射了復(fù)蘇狀態(tài)的遲緩愛(ài)德華氏菌CW7的大菱鲆在7 d時(shí)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。結(jié)果顯示，VBNC狀態(tài)的遲緩愛(ài)德華氏菌可能保持了它的致病潛能，伴隨著復(fù)蘇的實(shí)現(xiàn)，它的致病力也得以恢復(fù)。 對(duì)正常狀態(tài)的、升溫復(fù)蘇得到的及添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)升溫復(fù)蘇得到的溶藻膠弧菌VIB283細(xì)胞借助于API 20E進(jìn)行生理生化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與正常細(xì)胞及升溫復(fù)蘇得到的細(xì)胞相比，通過(guò)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)升溫復(fù)蘇得