下呼吸道感染常見致病菌基因診斷的研究.pdf

1、目的:根據(jù)DNA分子堿基互補配對的原理和不同來源、具有互補序列的單鏈DNA在一定條件下可以形成異源雙鏈DNA的特性,建立了一種利用病原菌特異長鏈DNA探針直接檢測生物素標(biāo)記細(xì)菌DNA的斑點雜交技術(shù),以快速檢測下呼吸道感染的常見致病菌.并將該方法應(yīng)用于臨床痰樣本的檢測,同時與痰培養(yǎng)和聚合酶鏈反應(yīng)方法進行比較,探討該方法在下呼吸道感染診斷中的應(yīng)用價值.方法:1.選擇肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌、甲氧西林耐藥金黃色葡萄

2、球菌、甲氧西林敏感表皮葡萄球菌、甲氧西林耐藥表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯桿菌、大腸埃希菌、嗜肺軍團菌這10種下呼吸道感染最常見的病原菌,作為檢測菌株.在這10種病原菌高度特異的基因序列內(nèi)利用聚合酶鏈反應(yīng)合成上述10種細(xì)菌特異的長鏈DNA探針,并將合成的特異探針固定在硝酸纖維素膜上,與用長臂光敏生物素標(biāo)記后的模板DNA進行斑點雜交反應(yīng),通過觀察雜交信號判斷存在何種細(xì)菌感染,同時研究該方法的敏感性和特異性.2.利用上述斑點雜交方法

3、檢測100份社區(qū)獲得性肺炎患者、150份醫(yī)院獲得性肺炎患者和50份非下呼吸道感染患者的痰標(biāo)本,觀察其檢測結(jié)果,并與培養(yǎng)法和聚合酶鏈反應(yīng)的檢測結(jié)果進行比較.結(jié)論:1.通過細(xì)菌特異的長鏈DNA探針直接與樣本DNA進行斑點雜交以檢測下呼吸道感染的病原菌是一種切實可行的方法.2.在社區(qū)獲得性肺炎患者的病原學(xué)診斷中,雜交法陽性檢出率顯著高于痰培養(yǎng)法,雜交法尤其適用于呼吸道苛養(yǎng)菌和培養(yǎng)周期長的致病菌的診斷.3.在醫(yī)院獲得性肺炎患者的病原學(xué)診斷中,雜