14種常見感染性腹瀉致病菌基因芯片檢測方法的研究.pdf

1、感染性腹瀉是由病原微生物（病原菌、病毒）及其產(chǎn)物所引起的以腹瀉為主要特征的腸道傳染病，是全球發(fā)病率高和流行廣泛的傳染病之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康。為了預(yù)防感染性腹瀉疾病的發(fā)生，建立有效、快速地檢測和鑒定腹瀉致病菌的方法則顯得尤為重要。
　　 近年來，隨著致病菌的不斷變異和新病原菌的出現(xiàn)，感染性腹瀉的發(fā)生呈上升趨勢，由感染性腹瀉所引起的死亡率也不容忽視，因此對感染性腹瀉的致病菌進行及時的檢測則具有重要的現(xiàn)實意義。本研究以引起人類感

2、染性腹瀉常見的14種致病菌為研究對象，運用基因芯片技術(shù)進行分子生物學(xué)檢測方法的研究。我們分別以ITS基因、gyrB基因、toxR基因、cadF基因、dnaJ基因、ipaH基因、hugA基因為靶基因，篩選出了針對志賀氏菌、致瀉性大腸桿菌、空腸彎曲桿菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、擬態(tài)弧菌、河弧菌、弗尼斯弧菌、副溶血弧菌、霍利斯弧菌、少女魚弧菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、親水單胞菌和鄰單胞菌的特異分子標(biāo)識，并成功研制了感染性腹瀉致病菌的基因檢測芯片。<

3、br>　　 通過對上述特異基因進行比對分別，我們設(shè)計了種屬特異性探針，經(jīng)過保守性和特異性的反復(fù)篩選驗證，最終得到了特異性探針37條。進行了雜交液、雜交時間、雜交溫度和洗滌時間等條件優(yōu)化的實驗，對芯片的特異性和靈敏度進行了驗證，并成功用于模擬樣品實驗和實際樣品實驗。
　　 本研究中基因芯片檢測腹瀉致病菌的技術(shù)是以優(yōu)化的多重PCR體系為基礎(chǔ)的。該芯片實現(xiàn)了高通量檢測致病菌的目的，即可以在一份樣品中同時檢測多種致病菌。芯片的靈敏度達