海水浴場常見致病菌PCR方法和基因芯片檢測方法的建立及應用.pdf

1、隨著沿海城市人口增長和沿海地區(qū)經濟的快速發(fā)展,海水浴場的污染也日益受到人們的關注。娛樂用水引發(fā)的呼吸道疾病、皮膚感染、腸胃炎等疾病的報道在國內外屢見不鮮,用大腸菌群等指示菌來評價水質已經受到國內外學者的質疑。因此,為減少娛樂用水風險,建立海水中致病性細菌的快速、靈敏、準確的檢測技術勢在必行。
　　本文建立了15種浴場中常見致病菌(嗜水氣單胞菌、單核增生李斯特菌、綠膿桿菌、產氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌、腸炎沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、空

2、腸彎曲桿菌、大腸桿菌O157:H7、創(chuàng)傷弧菌、糞鏈球菌、霍亂弧菌(非O1)、副溶血弧菌、溶藻弧菌、豚鼠氣單胞菌)的 PCR檢測方法,以及其中六種(嗜水氣單胞菌、單核增生李斯特菌、金黃色葡萄球菌、腸炎沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、溶藻弧菌)的基因芯片檢測方法,并將這兩種方法應用于我國四個重點海水浴場中主要致病菌的調查。具體的研究內容和研究結果如下:
　　1)2012年8-10月,于大連星海浴場,采集表層海水,采用PCR方法調查浴

3、場表層海水中這15種致病菌。調查結果為:在所采集的50份樣品中,各種菌的檢出率分別為金黃色葡萄球菌(50％)、豚鼠氣單胞菌(16％)、嗜水氣單胞菌(12％)、副溶血弧菌(12％)、糞鏈球菌(10％)、單核增生李斯特菌(4％)、溶藻弧菌(4％)、腸炎沙門氏菌(2％)、大腸桿菌O157:H7(2％)、綠膿桿菌(0％)、產氣莢膜梭菌(0％)、痢疾志賀氏菌(0％)、空腸彎曲桿菌(0％)、創(chuàng)傷弧菌(0％)、霍亂弧菌(非O1)(0％)。由此可見:大

4、連星海浴場中主要存在的致病菌有金黃色葡萄球菌、豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌、糞鏈球菌、單增李斯特菌、溶藻弧菌、腸炎沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7,依據致病菌的陽性檢出率,該浴場受到金黃色葡萄球菌、豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌的污染最為嚴重。
　　2)2013年8月,于全國4個重點海水浴場(北戴河天馬浴場、大連星海浴場、青島第一海水浴場、寧波松蘭山浴場),在游泳區(qū)設置3-5個站位,用PCR方法對采集的共15份海

5、水進行15種致病菌的檢測。調查結果為:青島第一海水浴場和大連星海浴場中檢出了嗜水氣單胞菌,寧波松蘭山浴場檢出了溶藻弧菌,四個浴場均未檢出其他病原菌。這一結果說明北戴河天馬浴場水質較好,致病菌較少,其他三個浴場受到致病菌不同程度的污染。
　　3)2013年8月,建立了嗜水氣單胞菌、單核增生李斯特菌、金黃色葡萄球菌、腸炎沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、溶藻弧菌六種浴場致病菌的基因芯片檢測方法,并對上述65份海水樣品進行了基因芯片檢驗

6、,結果顯示,致病菌的基因芯片檢驗結果與PCR檢測結果100％吻合,說明基因芯片檢驗方法可靠,結合其具有高通量的優(yōu)點,在實際監(jiān)測工作中可以考慮應用該方法。
　　本文建立了海水浴場中常見人類致病菌的快速檢測方法,該方法可快速篩查海水中的致病菌,為預防及診斷相關傳染病提供可靠的技術手段。其中,海水浴場中多種致病菌的基因芯片檢測方法,在國內尚未見到報道,該檢測方法具有靈敏、特異、快速且有效減少交叉污染概率的優(yōu)點,是海水浴場中人類致病菌引發(fā)