固定化肌酸激酶連續(xù)制備分離磷酸肌酸.pdf

1、磷酸肌酸是醫(yī)藥上大量使用的原料藥，用量不斷增加，需求潛力巨大。磷酸肌酸既可用化學(xué)法合成，也可用酶催化合成?；瘜W(xué)法合成磷酸肌酸由于條件苛刻，副反應(yīng)多、分離純化困難、產(chǎn)品純度低、環(huán)境污染嚴(yán)重，不符合節(jié)能減排、可持續(xù)發(fā)展的國(guó)策；因而，亟需研發(fā)一種既綠色、又具有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)的制備磷酸肌酸的方法。
　　以賴氨酸修飾的交聯(lián)殼聚糖微球作為載體，以戊二醛作為交聯(lián)劑，采用交換-交聯(lián)的方法固定化肌酸激酶，制備固定化肌酸激酶的最佳工藝條件為：pH為5.0，

2、戊二醛﹕載體氨基：酶（摩爾比）=1.36﹕1﹕2.9E-04下，常溫交換平衡，室溫交聯(lián)3h，固定化酶活力為21.6U/mg、活力回收68.％55。
　　固定化肌酸激酶的主要酶學(xué)性質(zhì)：Km=37.18mmol/L，為游離酶的1.09倍，Vmax=25.64mmol/min mg植酸酶，為游離酶的83.6%；最適pH范圍4～9，最適溫度范圍15～65℃，60℃半衰期為13.5h，室溫（25℃）重復(fù)使用半衰期38次，4℃貯存半衰期301

3、天。
　　以固定化肌酸激酶裝配成柱式生物反應(yīng)器連續(xù)制備磷酸肌酸，最佳工藝條件為：溫度40℃，pH=6.0，底物濃度為40mmol/L，底物流速為2.0mL/min時(shí)，連續(xù)制備磷酸肌酸，操作8h后，磷酸肌酸生成率為79.4%，固定化肌酸激酶的殘余活力為78.6%，連續(xù)水解半衰期為18.69h。
　　以陰離子交換樹(shù)脂交換水解生成的產(chǎn)物，以0.05～2mol/L NaCl為洗脫劑對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分離。以0.05mol/L NaCl，流速