安絲菌素固體發(fā)酵及安絲菌素P-O制備.pdf

1、安絲菌素（ansamitocin）屬于苯安莎類抗生素，具有強(qiáng)烈的腫瘤細(xì)胞毒性，是開發(fā)抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的重要原料。國(guó)內(nèi)安絲菌素發(fā)酵水平不高、商業(yè)供應(yīng)匱乏，為我國(guó)ADC藥物研發(fā)帶來一定難度。將安絲菌素發(fā)酵培養(yǎng)、分離提取及制備進(jìn)行綜合考慮，以提高安絲菌素產(chǎn)量、降低生產(chǎn)成本為目標(biāo)的研究，具有應(yīng)用前景。醫(yī)藥生物技術(shù)研究所作為我國(guó)微生物藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)之一，也在進(jìn)行ADCs類藥物的開發(fā)，并且急需穩(wěn)定的安絲菌素供應(yīng)。
　　在本研究中，我們

2、采用固體發(fā)酵珍貴束絲放線菌ATCC31565，建立了安絲菌素發(fā)酵，提取，分離純化的實(shí)驗(yàn)室制備工藝流程。
　　首先，我們建立了適合珍貴束絲放線菌ATCC31565穩(wěn)定產(chǎn)生豐富孢子的種子培養(yǎng)基(葡萄糖:8g/L，麥芽提取物:5g/L，瓊脂粉:15g/L，酵母提取物:1g/L，NaCl:5g/L)。通過摸索不同安絲菌素固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方，獲得了一種安絲菌素固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方（葡萄糖:20 g/L，玉米淀粉:30 g/L，棉籽餅粉:30

3、g/L，CaCl2:10g/L，瓊脂粉:20g/L），安絲菌素（純度85％）產(chǎn)量穩(wěn)定在約100mg/L，較ISP2培養(yǎng)基提高安絲菌素產(chǎn)量3倍多。在此基礎(chǔ)上，我們對(duì)珍貴束絲放線菌ATCC31565固體發(fā)酵培養(yǎng)物進(jìn)行乙酸乙酯萃取和硅膠柱層析，得到含安絲菌素P-2、P-3和P-4組分的混合物。
　　參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，我們對(duì)安絲菌素發(fā)酵進(jìn)行了一些驗(yàn)證和探索。例如，在培養(yǎng)基中添加異丁醇，提高了安絲菌素組分P-3的相對(duì)含量，但是安絲菌素總產(chǎn)量

4、未見提高。在培養(yǎng)基中添加纈氨酸(Val)或者稀土元素鈧(ScCl3)，未見安絲菌素發(fā)酵水平提高;同時(shí)，我們也進(jìn)行了安絲菌素液體搖瓶發(fā)酵，效價(jià)與固體發(fā)酵相當(dāng)，但液體發(fā)酵液粘稠度較高，給安絲菌素的分離提取帶來了一定不便。
　　最后，通過水解反應(yīng)化脫去安絲菌素P-2，P-3，P-4中的C-3?；鶄?cè)鏈;采用制備型HPLC獲得安絲菌素P-0純品。安絲菌素P-0得率約82％（純度大于99％）。提供安絲菌素樣品1.5g，用于醫(yī)藥生物技術(shù)研究所A