乳酸菌表面蛋白對免疫細胞體外激活及其過敏緩解效應研究.pdf

1、乳酸菌是人和動物消化道和生殖道中廣泛分布的菌群，從中分離的許多菌株已被廣泛用于益生菌制劑和發(fā)酵食品的生產(chǎn)過程中，在維持胃腸道正常功能、抑制病原菌入侵、預防腹瀉以及食物過敏等方面具有獨特的生理作用。乳酸菌表面存在200多種蛋白，在與宿主相互作用中發(fā)揮了重要作用，其中部分蛋白因子被發(fā)現(xiàn)是對宿主粘附和免疫調(diào)節(jié)作用的重要物質(zhì)基礎，但大多數(shù)蛋白的功能尚不清楚。深入研究和科學評價乳酸菌表面蛋白的功能對于增加乳酸菌及其相關產(chǎn)品的益生功能以及篩選新型菌

2、株和功能因子具有重要意義。本文應用腸上皮細胞、巨噬細胞、脾細胞以及致敏肥大細胞作為模型研究了不同乳酸菌菌株的表面蛋白在粘附、誘導增殖以及緩解過敏效應中的作用，以期為系統(tǒng)地研究表面蛋白的功能并開發(fā)其應用價值提供依據(jù)，主要研究工作及結果如下:
　　應用5 mol L-1氯化鋰結合鹽酸胍提取了植物乳桿菌LpYZU09、干酪乳桿菌LcYZU02、鼠李糖乳桿菌LrGG、發(fā)酵乳桿菌LfYZU15及戊糖片球菌PpYZU32的表面蛋白，分析了提取

3、物對乳酸菌對鼠腸上皮細胞、巨噬細胞和脾細胞的粘附抑制作用。結果顯示表面蛋白對3種細胞粘附菌體均具有顯著抑制效應，抑制作用具有細胞和菌株差異性，其中菌株LrGG表面蛋白對巨噬細胞粘附5種菌體普遍顯示了較強的抑制作用，抑制率為38.7％～76.0％。結果表明乳酸菌表面的蛋白類因子在粘附腸上皮細胞、巨噬細胞、脾細胞中發(fā)揮了重要作用。
　　應用MTT方法測定了不同菌株表面蛋白對鼠腸上皮細胞、巨噬細胞和脾細胞的誘導增殖效應，結果顯示不同菌株

4、表面蛋白對腸上皮細胞的誘導增殖指數(shù)為0.05～0.35，對巨噬細胞為0.05～0.42，對脾細胞為0.02～0.40，誘導效應具有菌株和劑量依賴性，菌株LrGG的誘導增殖指數(shù)顯著高于其他四種，表明乳酸菌表面的蛋白類因子在激活腸上皮細胞、巨噬細胞、脾細胞中發(fā)揮了重要作用。
　　應用BALB/c小鼠的卵蛋白致敏血清通過腹腔注射獲得致敏肥大細胞，并建立體外細胞過敏模型，測定了不同乳酸菌表面蛋白對肥大細胞脫顆粒的抑制作用。結果小鼠的卵蛋白

5、致敏血清中的IgE濃度在第14 d最高為4.58μg/rnL，獲得的肥大細胞的純度為87.60％，乳酸菌表面蛋白提取物(45μg/mL)對肥大細胞的存活沒有影響;卵蛋白（1.0 mg/ml）誘導致敏肥大細胞脫顆粒率為71.7±7.6％，顯著高于對照組(未誘導組，19.3±4.9％);不同乳酸菌表面蛋白對特異性激活的肥大細胞脫顆粒具有抑制作用，抑制率范圍為7.5～35.4％，但效應具有明顯的菌株差異性，植物乳桿菌LpYZU09、鼠李糖乳桿

6、菌LrGG和發(fā)酵乳桿菌LfYZU15表面蛋白的脫顆粒抑制率范圍在22.3～35.4％，顯著高于干酪乳桿菌LcYZU02和戊糖片球菌PpYZU32的抑制率(7.5～15.8％);蛋白作用劑量范圍內(nèi)對肥大細胞的脫顆粒緩解程度不存在明顯的劑量效應，均能極顯著的抑制IgE介導的肥大細胞脫顆粒率（P＜0.01），表明免疫激活的肥大細胞對乳酸菌表面蛋白極為敏感。
　　應用高效液相色譜法測定表面蛋白與體外肥大細胞作用過程中組胺釋放量。結果顯示:

7、不同表面蛋白干預后，肥大細胞的釋放組胺的范圍在71.5～104.2μg/L，相對于對照組（PBS組，107.9μg/L），不同菌株和劑量的表面蛋白對肥大細胞組胺釋放的抑制率范圍為3.4～33.7％;與脫顆粒緩解程度具有相關性。表面蛋白對免疫激活肥大細胞釋放組胺的緩解效應也存在菌株差異性，緩解組胺釋放能力較強的表面蛋白分別為SPLp、SPLr和SPLf（抑制率在22.2～33.7％之間），SPLp(0.45μg/mL)能夠極顯著的抑制組胺

8、的釋放(P＜0.01)，抑制率最高達到33.7％，SPLr和SPLf可以顯著抑制組胺的釋放（P＜0.05），組胺釋放量顯著低于對照組（10μg/mL B SA組，102.8±5.2μg/L）。在所測定的表面蛋白劑量范圍內(nèi)，組胺抑制率沒有發(fā)現(xiàn)明顯劑量效應。戊糖片球菌PpYZU32表面蛋白(SPPp)和干酪乳桿菌LcYZU02表面蛋白(SPLc)，雖然在一定程度上抑制肥大細胞中組胺的釋放（抑制率為3.4～8.3％），但與對照組（PBS組和B