基于納米金的多價化寡肽材料在促血管新生中的研究.pdf

1、在組織工程材料內(nèi)部構建充分的血管網(wǎng)絡，是實現(xiàn)具有正常功能厚組織工程面臨的首要問題。本研究利用納米金為載體，構建多價化REDV生物活性配體，并將此多價化配體修飾到海藻酸鈉支架內(nèi)部，期望材料獲得更好的血管新生誘導能力。
　　本文首先制備了不同表面價態(tài)的納米金，并通過計數(shù)法、MTT法和免疫熒光染色實驗考察了納米金表面Au（I）含量對內(nèi)皮細胞生長行為的影響。結果顯示，AuNPs表面金元素價態(tài)對內(nèi)皮細胞行為無顯著影響。此后，本文研究了游離態(tài)

2、及固定化納米金對內(nèi)皮細胞生長的影響，研究結果顯示：游離態(tài)AuNPs對內(nèi)皮細胞的生長具有濃度依賴的抑制作用，相對參比材料，加入1nM游離態(tài)納米金可使細胞黏附率下降約30％，增殖7天后細胞數(shù)量下降約25%。而將AuNPs共價修飾到玻璃片表面后未顯示明顯抑制效果，其細胞黏附和增殖與參比材料無顯著性差異，相應的黏著斑及AO/EB染色實驗表明內(nèi)皮細胞可在固定化AuNPs材料上形成良好的黏附并在增殖過程中保持良好的活性。在上述研究基礎上，將內(nèi)皮細胞

3、選擇性黏附多肽REDV修飾到固定有納米金的海藻酸鈉表面上，獲得具有多價化黏附配體的海藻酸鈉材料。結果顯示，在AuNPs修飾濃度為10nM時，內(nèi)皮細胞在相應的多價化REDV材料表現(xiàn)出較好的生長行為，黏附率較參比材料高出約30%；細胞增殖5天后細胞數(shù)量比參比提高約34%。此外，多價化REDV材料比相應的單價化材料表現(xiàn)出更好的細胞生長行為，黏附率和細胞增殖5天的細胞數(shù)量分別比單價化材料提高約30%和47%；相應的細胞染色實驗顯示內(nèi)皮細胞在多價

4、化REDV材料上的鋪展面積是單價化材料的3.3倍，而且保持了更好的細胞活性。最后，通過離子交聯(lián)制備了負載多價化REDV納米金配體的海藻酸鈉水凝膠，通過調節(jié)不同配比篩選出具有較好力學性能和較低溶脹率的材料。大鼠體內(nèi)實驗顯示，在材料植入14和21 d時，ALG+AuNPs-REDV材料周圍組織的新生血管密度分別為48.1/mm2和74.5/mm2，比ALG+AuNPs參比材料高出約63.6%和98.1%，而且多價化REDV凝膠材料比相應的單