血管化調(diào)控因子在糖尿病難愈創(chuàng)面新生血管形成障礙中的作用研究.pdf

1、眾所周知，血管基底膜增厚致管腔狹窄引起的血供不足、血流變慢、生長因子分泌不足等是誘發(fā)糖尿病足形成的重要因素。值得注意的是：與糖尿病足誘因不同的外源性創(chuàng)傷所致的糖尿病皮膚創(chuàng)面，其新生血管則不發(fā)生血管基底膜增厚現(xiàn)象，但卻存在新生血管化的障礙。創(chuàng)面愈合中新生血管化包括兩個關(guān)鍵要素，即內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管形成。那么，在糖尿病創(chuàng)面中新生血管化障礙的原因是血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常?還是血管形成能力低下?或兩者兼而有之?值得深入探討。 目的：通過對

2、糖尿病難愈創(chuàng)面血管化障礙及其相關(guān)事件的研究，明確內(nèi)皮細(xì)胞增殖、促血管化形成因子表達(dá)及其通路在創(chuàng)面新生血管化障礙中的作用。 方法：SD大鼠隨機(jī)分成STZ誘導(dǎo)糖尿病組(n=50)和非糖尿病對照組(n=50)，造成其背部深二度燙傷模型，觀察傷后1、3、7、14和21d的創(chuàng)面愈合率、血管化及Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF和Flt-1的mRNA和Ang-1、Ang-2和VEGF蛋白表達(dá)。高濃度葡萄糖和AGEs干預(yù)條件下，觀察

3、體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后愈合率，形成血管樣結(jié)構(gòu)的能力、Ang-2和VEGF的蛋白質(zhì)表達(dá)以及Tie-2受體表達(dá)。通過siRNAs技術(shù)阻斷Ang-2，研究高糖和AGEs環(huán)境對血管內(nèi)皮細(xì)胞在三維培養(yǎng)體系中形成管狀樣結(jié)構(gòu)的影響及其作用途徑。 結(jié)果：(1)傷后14d糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合較正常對照組顯著延遲(31.5±1.0％vs.59.4±4.2％，p<0.01)。傷后1d，3d，7d，14d和21d糖尿病新生血管化熒光密度值分別為1±0

4、.1，7±0.8，12±1.4，15±2.1和17±1.8，正常對照組分別為8.5±0.5，35±1.5，60±3.0，72±3.4和72±3.4，兩組比較各時相點(diǎn)糖尿病創(chuàng)面血管化均顯著降低，p<0.01。各時相點(diǎn)比較新生血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量與正常組比較無顯著差異(p>0.05)，但部分新生血管內(nèi)皮細(xì)胞未形成具有功能性的血管，存在著新生血管形成障礙現(xiàn)象；糖尿病大鼠深二度燙傷后創(chuàng)面Ang-2和Tie-2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)顯著高于正常組，V

5、EGF及其受體Flt-1傷前、傷后14d和21d高于正常組，但傷后1d、3d和7d顯著低于正常組。 (2)血管內(nèi)皮細(xì)胞分別在體外高糖、AGEs、高糖加AGEs及正常培養(yǎng)環(huán)境下遭損傷后，愈合率無顯著差別；高糖和AGE抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞在matrigel三維培養(yǎng)體系下形成血管樣結(jié)構(gòu)；在高糖和AGEs環(huán)境下，血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)Matrigel誘導(dǎo)后表達(dá)Ang-2水平較正常組顯著升高，而VEGF卻顯著低于正常組；高糖培養(yǎng)下Tie-2受體為內(nèi)皮

6、胞漿和胞核表達(dá)，AGE環(huán)境下Tie-2僅為核內(nèi)表達(dá)，而正常組則為細(xì)胞膜表達(dá)。 (3)經(jīng)Ang-2 siRNA干擾，高糖和AGE環(huán)境培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞Ang-2mRNA和蛋白表達(dá)顯著減少，但在matrigel誘導(dǎo)下可恢復(fù)血管樣結(jié)構(gòu)的形成能力，而對照組細(xì)胞血管樣結(jié)構(gòu)的形成能力卻被抑制。 結(jié)論：糖尿病難愈創(chuàng)面中血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力未發(fā)生明顯低下，但存在著血管形成能力的低下，呈現(xiàn)創(chuàng)面新生血管化障礙的特點(diǎn)，其本質(zhì)是新生血管形成障礙。這