綠原酸對缺氧環(huán)境下干細胞來源軟骨樣細胞凋亡的影響.pdf

1、研究背景和目的:
　　 軟骨細胞是構成關節(jié)軟骨的主要基礎,但因其高度分化增殖能力低下造成軟骨的再生能力差,使得軟骨損傷后難以自然修復。干細胞及其來源軟骨細胞移植治療解決了軟骨細胞低增殖力問題,已成為臨床上治療軟骨損傷的有效方法[1]。大量研究發(fā)現(xiàn)體外常氧環(huán)境下培養(yǎng)的細胞移植進入類似關節(jié)腔內(nèi)缺氧環(huán)境[2]后活性及存活率均下降[3、4],Wakitani[5]等研究中認為移植細胞低存活率使得干細胞分化的軟骨的厚度、機械強度等均不及正

2、常軟骨,所以認為細胞移植的低存活率是制約這一方法應用的因素。綠原酸(chlorogenic acid,CGA)為苯丙素類極性有機酸,具有強抗氧化能力可抑制氧化應急引起的凋亡[6]。綠原酸對缺氧環(huán)境下細胞內(nèi)活性氧改變引起的凋亡的作用,目前還不清楚。本實驗擬體外誘導骨髓間充質(zhì)細胞為軟骨樣細胞,0.1％O2缺氧環(huán)境下模擬關節(jié)腔內(nèi)的缺氧環(huán)境模型,觀察綠缺氧環(huán)境下原酸對軟骨樣細胞的作用,探討其對軟骨細胞的影響及可能機制。
　　 研究內(nèi)容和

3、方法:
　　 采用體外培養(yǎng)大鼠間充質(zhì)干細胞,以含0.2mg·L-1 BMP-2的DMEM誘導誘導液培養(yǎng)12天使其成為軟骨樣細胞后進行實驗。分為(A)正常對照組；(B)綠原酸組;(C)0.1％O2缺氧環(huán)境組；(D)綠原酸+0.1％O2缺氧環(huán)境組。進而檢測各組Hoechst33258熒光染色檢測細胞凋亡、細胞內(nèi)活性氧水平;RT—PCR檢測不同組軟骨細胞Caspase-3和Bcl-2基因的表達。
　　 結果:
　　 與

4、正常對照組比較,0.1％O2缺氧環(huán)境12小時能明顯造成干細胞來源軟骨樣細胞的凋亡(P<0.05),綠原酸可降低0.1％O2缺氧引起的軟骨樣細胞凋亡率(P<0.05),活性氧水平下降,Bcl—2表達增強,Caspase-3表達減弱。
　　 結論:
　　 綠原酸可抑制0.1％O2缺氧引起的內(nèi)皮細胞凋亡,其作用機制可能與降低細胞內(nèi)的活性氧水平,穩(wěn)定細胞的氧化還原狀態(tài)來保護線粒體膜電位,促進凋亡抑制基因Bcl-2的表達及抑制Ca