T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)篩選與p38 MAPK及PRAK相結(jié)合蛋白.pdf

1、ABSTRACT IN CHINESEp38 MAPK是一種應(yīng)激激活的絲/蘇氨酸蛋白激酶,屬于MAPK超家族;目前已發(fā)現(xiàn)p38 MAPK家族成員有p38(α)、p38 β、p38 γ、p38 δ,分子量約38~40kD.各個亞型之間的不同功能部分與它們在不同組織的表達(dá),激活方式以及底物特異性相關(guān),不同的p38能被細(xì)胞應(yīng)激(紫外線輻射、滲透性休克、熱休克、脂多糖、蛋白合成抑制劑)、某些細(xì)胞因子IL-1、TNF-α等激活.我們亞克隆了兩個H

2、PC2的真核表達(dá)載體:pEGFP-C2/HPC2與pcDNA3-flag/HPC2,并將pEGFP-C2/HPC2轉(zhuǎn)染人胚腎293細(xì)胞(HEK293)中,發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)型綠色熒光(EGFP)主要存在于核內(nèi),并且在核的某些區(qū)域有較強(qiáng)EGFP的不連續(xù)聚集,呈顆粒狀分布;隨后我們探討了HPC2對應(yīng)激刺激的反應(yīng),發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)的EGFP/HPC2僅對山梨醇(sorbito1)引起的高滲有反應(yīng),由刺激前的聚集于核內(nèi)發(fā)展為刺激后的彌散分布于整個細(xì)胞,而

3、對LPS、NaAsO2、H2O2刺激并未出現(xiàn)這種反應(yīng);我們將pcDNA3-flag/HPC2轉(zhuǎn)染HEK293后,給予sorbitol刺激,利用核質(zhì)分離和western blot技術(shù)得到進(jìn)一步證實(shí);雖然,我們在篩選過程中用p38和PRAK同時得到HPC2,但研究發(fā)現(xiàn)p38特異性抑制劑SB203580不能阻止sorbitol引起HPC2的出核效應(yīng).綜上所述,我們利用T7噬菌體展示篩選系統(tǒng),以p38 MAPK和PRAK為靶蛋白,篩選了人肝和人