抱雌溝蛋白篩選日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)噬菌體展示cDNA文庫(kù)的研究.pdf

1、血吸蟲(chóng)病(Schisosomiasis)是由血吸蟲(chóng)寄生于人體所引起的一種分布廣泛、危害嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲(chóng)病。血吸蟲(chóng)是吸蟲(chóng)中罕見(jiàn)的雌雄異體形式，在血吸蟲(chóng)發(fā)育過(guò)程中，雌雄蟲(chóng)合抱是雌蟲(chóng)發(fā)育成熟的前提，雌雄蟲(chóng)間信息物質(zhì)的傳遞通過(guò)合抱實(shí)現(xiàn)。因此，如果能夠找出這種雌雄蟲(chóng)間傳遞的信息物質(zhì)，對(duì)研究血吸蟲(chóng)雌雄蟲(chóng)之間的相互作用、血吸蟲(chóng)生殖發(fā)育機(jī)理以及對(duì)抗血吸蟲(chóng)疫苗研究有非常重要的意義。噬菌體展示技術(shù)是新近發(fā)展起來(lái)的，將外源肽或蛋白與特定噬菌體衣殼蛋白融合

2、，并展示于噬菌體表面的一項(xiàng)新技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于分子間識(shí)別機(jī)制的研究。 本研究用融合表達(dá)的日本血吸蟲(chóng)抱雌溝蛋白篩選日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)噬菌體展示cDNA文庫(kù)，隨機(jī)選取獲得的陽(yáng)性噬菌體克隆進(jìn)行測(cè)序、生物信息學(xué)分析，并對(duì)其中部分陽(yáng)性克隆進(jìn)行了免疫預(yù)防效果評(píng)估。 經(jīng)過(guò)三輪篩選后，噬菌體由第一輪的1.8×10-6pfu增加到第三輪的1.6×10-4pfu，富集了將近90倍，成功的篩除了低親和力和非特異性結(jié)合的噬菌體。隨機(jī)挑取陽(yáng)性噬菌體克

3、隆進(jìn)行測(cè)序以及生物信息學(xué)分析，共獲得25個(gè)有效EST序列，其中20個(gè)與已知基因或表達(dá)序列標(biāo)簽同源，5個(gè)EST序列與已知基因或表達(dá)序列標(biāo)簽均無(wú)同源性，為新的表達(dá)序列標(biāo)簽。對(duì)20個(gè)有效編碼蛋白的功能預(yù)測(cè)結(jié)果顯示：10個(gè)EST序列為卵殼蛋白相關(guān)基因與血吸蟲(chóng)卵的發(fā)育相關(guān)，3個(gè)EST序列為核糖體蛋白相關(guān)編碼基因序列，7個(gè)EST序列編碼蛋白與信號(hào)受體顆粒的亞基同源。 將篩選得到的陽(yáng)性噬菌體克隆進(jìn)行功能分組后，選擇5種噬菌體展示抗原，以每只1

4、013pfu免疫BALB/c小鼠并攻擊感染日本血吸蟲(chóng)尾蚴。結(jié)果顯示：展示日本血吸蟲(chóng)SJCHGC06360蛋白(19號(hào)克隆)噬菌體免疫組和展示兩種未知蛋白噬菌體(6號(hào)克隆和18號(hào)克隆)聯(lián)合免疫組獲得了顯著的免疫預(yù)防效果，分別誘導(dǎo)了40.53％和31.14％的減蟲(chóng)率、35.31％和44.65％的肝臟減卵率。抗體水平檢測(cè)結(jié)果顯示：免疫組均取得了較高的特異性抗體。 本項(xiàng)研究首次用日本血吸蟲(chóng)抱雌溝蛋白篩選日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)噬菌體展示cDNA文