紫外線致弱童蟲免疫血清篩選日本血吸蟲成蟲cDNA文庫的研究_1801.pdf

1、中國疾病預(yù)防控制中心碩士學(xué)位論文紫外線致弱童蟲免疫血清篩選日本血吸蟲成蟲cDNA文庫的研究姓名：李小紅申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：劉述先20030601為三磷酸甘油醛脫氫酶編碼基因。二血吸蟲肌球蛋白部分重鏈基因核酸疫苗的構(gòu)建用PrimerPremier軟件設(shè)計(jì)肌球蛋白(Myosin)部分重鏈基因的PCR引物，并在上下分別引入EcoRI和XhoI限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。限制性內(nèi)切酶的確定方法為：DNAsis軟件分析目的基因的酶切位點(diǎn)

2、，并與pcDNA3載體多酶接頭的酶切位點(diǎn)進(jìn)行比較，選擇目的基因中沒有而載體中剛好存在的酶切位點(diǎn)。PCR法擴(kuò)增且的基因，并把目的基因克隆入真核表達(dá)載體]。cDNA3中，構(gòu)建peDNA3／myosin重組質(zhì)粒，所得重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌JMl09菌株，大量擴(kuò)增，送測序公司測序。測序結(jié)果表明，構(gòu)建的peDNA3／myosin重組質(zhì)粒與已報(bào)道的血吸蟲myosin重鏈基因讀碼框一致。三pcDNA3／myosin核酸疫苗在小鼠中的保護(hù)實(shí)驗(yàn)60只C57

3、BL／6雌性小鼠隨機(jī)分為三組。將100lag重組質(zhì)粒注射核酸疫苗免疫組小鼠的兩側(cè)殷四頭肌，每側(cè)50ug，免疫三次，間隔兩周。以pcDNA3質(zhì)粒代替重組質(zhì)粒免疫空載體對照組小鼠，方法同上。正常感染對照組小鼠不免疫。攻擊感染前，對核酸疫苗組、空載體對照組小鼠剪尾采血，ELISA法檢測抗體效價(jià)，結(jié)果表明核酸疫苗免疫組血清滴度顯著高于空載體對照組。同時(shí)隨機(jī)選取免疫組小鼠2只，空載體對照組小鼠1只拉頸處死，取腿部肌肉做冰凍組織切片，進(jìn)行免疫酶染色