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1、目的:研究人SLC22A3基因intron7及其SNP位點(diǎn)rs2048327(A/G)對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)作用。
方法:以包含人SLC22A3基因全長(zhǎng)序列的細(xì)菌人工染色體(BAC)為模板,PCR擴(kuò)增人SLC22A3 intron7,克隆入熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-Basic和pGL3-Promoter,得到野生型重組質(zhì)pGL3-Basic-SLCi7wt和pGL3-Promoter-SLCi7wt;以pGL3-Promoter
2、-SLCi7wt為模板,行PCR定點(diǎn)誘變,構(gòu)建突變型重組質(zhì)粒pGL3-Promoter-SLCi7mut。重組質(zhì)粒與內(nèi)參質(zhì)粒pRL-SV40共轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞HEK293T,24 h后檢測(cè)熒光素酶活性。利用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0分析各組熒光素酶活性之間的差異。
結(jié)果:成功構(gòu)建了包含野生型和突變型人SLC22A3 intron7的重組質(zhì)粒 pGL3-Basic-SLCi7wt、 pGL3-Promoter-SLCi7wt以及pG
3、L3-Promoter-SLCi7mut。野生型重組質(zhì)粒pGL3-Basic-SLCi7wt熒光素酶活性與pGL3-Basic無(wú)顯著差異(P=0.986);野生型重組質(zhì)粒pGL3-promoter-SLCi7wt熒光素酶活性相較于pGL3-Promoter顯著降低((3.514±0.09609)vs(6.286±0.3699),P=0.000);突變型重組質(zhì)粒pGL3-Promoter-SLCi7mut熒光素酶活性(2.089±0.33
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