Fis對傷寒沙門菌基因表達的系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用.pdf

1、江蘇大學碩士學位論文Fis對傷寒沙門菌基因表達的系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用姓名：李安平申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：黃新祥20100608江蘇大學碩士學位論文至大腸埃希菌TGl中篩選陽性質(zhì)粒，經(jīng)序列分析鑒定后將陽性重組載體及空載體分別轉入加基因缺陷變異株，作為加基因缺陷回補株和對照株。(5)實時熒光定量PCR(qRTPCR)分析：選擇部分表達差異基因，設計并合成特異性引物，進行實時熒光定量PCR，驗證DNA芯片分析結果；(6)動力實

2、驗分析：用半固體平板培養(yǎng)觀察野生株、加缺陷變異株和回補株的動力；(7)加基因的克隆與表達：根據(jù)加基因兩端序列設計引物，以傷寒沙門菌基因組為模板，通過PCR擴增獲得不含啟動子及終止子區(qū)域的加基因編碼區(qū)DNA片段，構建表達載體pBAD／Fis，轉入大腸埃希菌Topl0中，用L邛_ⅡJ拉伯糖誘導加基因的表達，Ni柱純化Fis蛋白。結果：(1)PCR及序列分析證實，加基因缺陷變異株中基因159bp被6bp取代，表明成功構建加基因缺陷變異株；(2