Fasudil對(duì)EAE小鼠脊髓內(nèi)細(xì)胞Rock-Ⅱ表達(dá)的影響.pdf

1、目的：Rho/Rho 激酶(Rock)信號(hào)途徑是機(jī)體中普遍存在的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、粘附、移行等，被認(rèn)為是控制細(xì)胞行為的上游信號(hào)分子。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)許多神經(jīng)病理狀態(tài)均有Rock的激活，而應(yīng)用Rock 抑制劑可改善臨床癥狀和病理狀況。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用Rho 激酶抑制劑Fasudil 治療C57BL/6小鼠EAE，觀察其臨床療效和潛在的免疫學(xué)機(jī)制，目的在于探討EAE的發(fā)病機(jī)制和應(yīng)用Fasudil 治療EAE的作用機(jī)制，為EAE和MS的

2、免疫病理機(jī)制提供新的理論支持，也為今后臨床應(yīng)用Fasudil 輔助治療MS等CNS 自身免疫性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：雌性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為EAE組20只，F(xiàn)asudil 干預(yù)組20只，佐劑組20只。
　　 EAE和Fasudil 干預(yù)組用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白35-55（MOG35-55）進(jìn)行免疫，建立EAE模型，佐劑組以等量生理鹽水代替MOG35-55作為EAE組的對(duì)照。Fasudil 干預(yù)組于免疫后

3、第7天腹腔注射Fasudil（50mg/kg/d），連續(xù)治療14天。EAE組和佐劑組給以等量生理鹽水作為對(duì)照。免疫后隔天觀察各組動(dòng)物體重變化和發(fā)病情況，并按國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定臨床癥狀。在免疫后4周處死動(dòng)物，取小鼠脊髓腰膨大處，行HE 染色、Luxol Fast Blue 染色及間接免疫熒光染色，觀察各組小鼠病理變化及Rock-Ⅱ的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.利用MOG35-

4、55 多肽成功地誘導(dǎo)了C57BL/6小鼠EAE 模型。EAE組發(fā)病率100％（n=20），平均起病時(shí)間為13.35±1.31天，高峰期平均癥狀評(píng)分3.80±0.78，高峰期平均體重15.75±0.81。在發(fā)病后第12天開始相繼出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，發(fā)病輕重不一，首先表現(xiàn)為進(jìn)食減少，活動(dòng)量減少，皮毛不光滑，體重減輕，尾部無(wú)力下垂，隨病情加重出現(xiàn)一側(cè)后肢癱瘓，進(jìn)一步發(fā)展為雙側(cè)后肢癱瘓，不能自主翻身，嚴(yán)重者伴有前肢癱瘓，最高評(píng)分達(dá)到4分。Fas

5、udil 干預(yù)組發(fā)病率35％（n=20），較EAE組降低；平均起病時(shí)間15.55±1.50天，較EAE組明顯延遲（P<0.01）；高峰期平均癥狀評(píng)分2.24±0.26，較EAE組降低（P<0.05）；高峰期平均體重19.56±0.66，與EAE組相比差異顯著（P<0.05）。這4 項(xiàng)臨床指標(biāo)比較，F(xiàn)asudil 干預(yù)組與EAE組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。佐劑組未見(jiàn)發(fā)病，體重持續(xù)增加。
　　 2.HE 染色結(jié)果顯示，EAE組小鼠出現(xiàn)明顯炎性

6、細(xì)胞浸潤(rùn), Fasudil 干預(yù)組和佐劑組則炎性浸潤(rùn)較輕，EAE組、Fasudil 干預(yù)組和佐劑組Okuda 炎性細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分呈明顯差異。EAE組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分3.25±0.56，F(xiàn)asudil 干預(yù)組2.13±0.44，佐劑組1.38±0.78。EAE組和Fasudil 干預(yù)組、EAE組和佐劑組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Luxol Fast Blue 染色顯示，EAE組髓鞘脫失較Fasudil 干預(yù)組和佐劑組更明顯，且與病

7、情的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。
　　 3.Rock-Ⅱ在EAE組、Fasudil 干預(yù)組和佐劑組脊髓中均有表達(dá)，且表達(dá)情況與小鼠的病情輕重程度和臨床評(píng)分相一致,在EAE組血管內(nèi)皮細(xì)胞明顯表達(dá)。觀察同一視野脊髓內(nèi)Rock-Ⅱ陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量，EAE組小鼠為31.78±1.04，F(xiàn)asudil 干預(yù)組20.22±1.56，佐劑組為18.50±1.39，EAE組和Fasudil 干預(yù)組、EAE組和佐劑組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。

8、>　　 結(jié)果表明Fasudil 干預(yù)組Rock-Ⅱ的表達(dá)明顯低于EAE組。
　　 結(jié)論：
　　 1.用MOG35-55抗原乳劑免疫C57BL/6小鼠，可成功建立EAE 模型。
　　 2.Rho/Rock信號(hào)通路的激活與EAE 發(fā)病有關(guān)。
　　 3.Rock 抑制劑——Fasudil能夠降低EAE的發(fā)病率，緩解EAE 臨床癥狀，減輕炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)和髓鞘脫失。
　　 4.Rock 抑制劑――Fasu