FTY720對(duì)大鼠急性脊髓損傷后脊髓內(nèi)CD3+T淋巴細(xì)胞和CD19+B淋巴細(xì)胞的影響.pdf

1、背景:
　　 急性脊髓損傷(acutespinalcordinjury，ASCI)是一種高致殘性損傷是脊髓損傷中常見的疾病，它嚴(yán)重威脅到人類生命健康。SCI又包括原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷。原發(fā)性損傷指神經(jīng)組織細(xì)胞直接被外力作用，使其出現(xiàn)出血、壞死灶等。原發(fā)性損傷是不可逆性的。盡管原發(fā)損傷可直接造成損傷部位細(xì)胞死亡，但脊髓大的損傷主要源于繼發(fā)性損傷，繼發(fā)性損傷是導(dǎo)致脊髓損傷難以治愈的關(guān)鍵，目前大部分研究將重點(diǎn)放在繼發(fā)性脊髓損傷上，從

2、細(xì)胞水平到分子水平，再到基因水平。免疫反應(yīng)在脊髓損傷中起重要作用，而淋巴細(xì)胞是構(gòu)成免疫系統(tǒng)的主要細(xì)胞，它分為許多表型與功能均不同的群體，如T、B、NK細(xì)胞等。未經(jīng)活化的T細(xì)胞不能進(jìn)入脊髓，通過調(diào)整這一免疫過程達(dá)到治療脊髓損傷。FTY720是一種新型的免疫抑制劑，對(duì)于急性脊髓損傷后具有保護(hù)作用。其主要機(jī)制為選擇性減少外周循環(huán)淋巴細(xì)胞數(shù)，同時(shí)不損害機(jī)體免疫應(yīng)答能力。
　　 目的:
　　 本實(shí)驗(yàn)以改良Allen'S方法致急性脊

3、髓損傷大鼠模型為研究對(duì)象，通過不同時(shí)段觀察大鼠急性脊髓損傷后FTY720對(duì)于脊髓內(nèi)的CD3+T淋巴細(xì)胞和CD19+B淋巴細(xì)胞的影響，進(jìn)一步探討FTY720對(duì)于脊髓損傷的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 健康成年清潔級(jí)SD(SpragueDawley)大鼠75只，體重180～220g左右，雌性，隨機(jī)分為3組，假手術(shù)組（A組）、模型組（B組）和FTY720治療組（C組），其中每組各25只。假手術(shù)組只作椎板切除無(wú)脊髓損傷。模型組

4、及FTY720治療組做椎板切除及脊髓損傷。無(wú)菌條件下采用改良Allen'S法打擊建立T9脊髓損傷模型。建模后，F(xiàn)TY720治療組按3mg/kg生理鹽水稀釋，取0.3mL灌胃，假手術(shù)組和模型組以等量生理鹽水灌胃。術(shù)后分籠飼養(yǎng)，光照，自然通風(fēng)。觀察進(jìn)食情況，切口愈合情況，不良反應(yīng)情況等。
　　 各組實(shí)驗(yàn)大鼠分別于術(shù)后3d、7d、14d、21d、28d取材，分別進(jìn)行微環(huán)境病理學(xué)觀察細(xì)胞形態(tài)，脊髓壞死、空洞。免疫熒光觀察各組脊髓壞死、脊

5、髓空洞、出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等情況。圖像資料采用Image-proplus6.0醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)分析處理，數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進(jìn)行處理。
　　 結(jié)果:
　　 1、病理學(xué)觀察:A組假手術(shù)組為正常組織，其組織排列層次分明，可見形態(tài)結(jié)構(gòu)正常的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，各時(shí)間點(diǎn)脊髓結(jié)構(gòu)完整，神經(jīng)元形態(tài)正常，灰白質(zhì)交界清楚，未見出血、水腫、空洞、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。損傷后3天，7天、14天、21天模型組及治療組損傷區(qū)均有出血、水腫，白質(zhì)內(nèi)

6、存在大片出血灶，灰質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞有散在出血灶，出現(xiàn)炎細(xì)胞聚集、浸潤(rùn)。但細(xì)胞浸潤(rùn)程度特別是淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度，F(xiàn)TY720治療組均輕于模型對(duì)照組。
　　 2、免疫熒光觀察
　　 CD3+T淋巴細(xì)胞:假手術(shù)組（A組）無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。在模型組（B組）呈現(xiàn)逐步緩慢上升趨勢(shì)，并于14天組達(dá)到最高，在21天組突然出現(xiàn)大幅度下降情況。FTY720治療組（C組）中，CD3T淋巴細(xì)胞在3-7天時(shí)有升高趨勢(shì)，在7-14天時(shí)出現(xiàn)下降，14-21天繼續(xù)呈

7、現(xiàn)升高趨勢(shì)。28天出現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，淋巴細(xì)胞出現(xiàn)明顯聚集明顯。
　　 CD19+B淋巴細(xì)胞:假手術(shù)組（A組）無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。在模型組（B組）和FTY720治療組（C組）對(duì)照中，3天、7天、14天、21天、28天無(wú)明顯陽(yáng)性表達(dá)，B淋巴細(xì)胞各組相鄰時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著差異及波動(dòng)情況。28天組整體出現(xiàn)淋巴細(xì)胞聚集增多現(xiàn)象。
　　 結(jié)論:
　　 1、正常大鼠脊髓內(nèi)檢測(cè)不出活化的淋巴細(xì)胞，脊髓損傷后SD大鼠脊髓內(nèi)出現(xiàn)大量淋巴細(xì)胞聚集