慢病毒介導的vegfr2 RNA干擾研究洛克沙胂體外促血管生長中的VEGFR2作用機制.pdf

1、分類號UDC埸H1大季YANGZHOUUNIVERSITY學號叢圣!Q魚墨2密級碩士學位論文(全日制專業(yè)學位)慢病毒介導的vegfr2RNA干擾研究洛克沙胂體外促血管生長中的VEGFR2作用機制指導教師姓名：申清學位級別：論文提交日期：學位授予單位：吳銀超堡亟笙墼握!揚盟盤鱟!婆蒸塹劌12至5QQ窆夔室塹窒亟!壅蒸壅整型墊墼些堂墮122量蘭QQ碩士學科專業(yè)名稱：獸醫(yī)碩士2Q塵墾生壘旦論文答辯日期：2Q蘭壘生魚旦塵旦塹劌盤鱟學位授‘弘日期

2、：2Q至墨生魚旦答辯委員會主席：蔓3疊塹窒員2018年6月吳銀超：慢病毒介導的vegfr2RNA干擾研究洛克沙胂體外促血管生長中的VEGFR2作用機制慢病毒介導的vegfr2RNA干擾研究洛克沙胂體外促血管生長中的VEGFR2作用機制摘要研究背景：血管新生在疾病的發(fā)病機制中有極其重要的作用，如果發(fā)生異常，機體會出現(xiàn)疾病，如腫瘤、腦中風、冠心病、多種眼科疾病等。VEGF／VEGFR2信號通路在血管新生過程中參與新血管的生長與重建，血管生成

3、因子通過調(diào)控血管內(nèi)皮細胞表面的VEGFR2的活化及表達，進而激活或抑制其下游相關(guān)信號傳導通路的信號傳導，從而發(fā)揮調(diào)控血管內(nèi)皮生長增殖與機體血管形成的作用。本課題組在前期研究發(fā)現(xiàn)洛克沙胂(ROX)在體內(nèi)外能促進血管生成，使VEGFⅣEGFR2的表達上調(diào)。本文利用VEGFR2的有效沉默基因序列，構(gòu)建靶向vegfr2基因的siRNA重組慢病毒的載體系統(tǒng)。使用重組慢病毒感染內(nèi)皮細胞，沉默VEGFR2的表達，以此阻斷VEGF／VEGFR2信號通路

4、的傳導，研究VEGFR2在ROX促血管生成作用中的調(diào)節(jié)作用。研究目的：通過構(gòu)建慢病毒載體表達靶向vegfr2基因的shRNA，沉默VEGF／VEGFR2信號通路中的關(guān)鍵受體VEGFR2，研究ROX促進內(nèi)皮細胞生長、體外血管生成作用中的VEGF／VEGFR2作用機制。方法：①重組慢病毒載體的構(gòu)建：分別構(gòu)建靶向大鼠vegff2基因的shRNA慢病毒表達載體和陰性RNA對照的慢病毒載體。篩選出感染大鼠內(nèi)皮細胞的條件，通過RTPCR和Weste

5、rnBlot檢測VEGF的表達，評價所建慢病毒載體對靶基因的干擾效率。②靶向vegfr2慢病毒載體干擾對ROX促進大鼠血管內(nèi)皮細胞生長的影響：不同處理分組如下：PBS組、10LM的ROX組、NC組(陰’ItshRNA組)、sh—vegff2組、shvegff2ROX組。通過內(nèi)皮細胞BrdU陽性率、遷移距離、管樣結(jié)構(gòu)的節(jié)點數(shù)和分支長度，分別檢測血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移距離和管樣結(jié)構(gòu)的形成能力；WesternBlot檢測感染內(nèi)皮細胞中VEG