靶向VEGFR2光聲-超聲雙模態(tài)造影劑的制備及體外實驗研究.pdf

1、第一部分靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑的制備及其特性研究
　　目的：制備一種靶向血管內皮生長因子受體2（VEGFR2）的光聲/超聲雙模態(tài)高分子造影劑，檢測其一般物理性質，體外光致相變效果及相變過程中光聲信號的變化情況。
　　方法：采用多步乳化法制備載有印度墨水和液態(tài)氟碳（PFH）的高分子造影劑；通過碳二亞胺法將抗VEGFR2單克隆抗體與高分子造影劑表面活化的羧基（-COOH）相偶聯(lián)，制備出靶向VEGFR2高分子造影劑

2、（Vi-PFH-PLGA）。檢測其結構，粒徑，吸收光譜等一般物理性質，并通過間接免疫熒光法及流式細胞術檢測抗體與造影劑的連接情況?？疾霽i-PFH-PLGA的體外光致相變情況，近紅外光輻照，光學顯微鏡下觀察Vi-PFH-PLGA相變效果，光聲成像儀采集其相變過程中光聲信號變化情況。
　　結果：所制備的靶向高分子造影劑形態(tài)規(guī)則，呈球形，平均粒徑為(565.5±15.6) nm,平均電位為(-15.8±3.21)，紫外分光光度計測得V

3、i-PFH-PLGA在400~900nm處均具有較好的光吸收能力，間接免疫熒光法觀察到抗體成功的連接到造影劑表面，且流式細胞儀測得抗體微球連接率為99.72％。Vi-PFH-PLGA溶液經近紅外光輻照后，光學顯微鏡下觀察到較多的Vi-PFH-PLGA發(fā)生液氣相轉變產生微泡，光聲成像儀檢測到其相變過程中可產生較強的光聲信號，且信號強度隨著時間的變化呈迅速升高后逐漸降低至穩(wěn)定的趨勢。
　　結論：成功制備出靶向VEGFR2光聲/超聲雙模

4、態(tài)造影劑，其形態(tài)規(guī)則，分布均勻，抗體連接率高，具備較好的光聲學特性和光致相變能力，為后續(xù)的體外尋靶及雙模態(tài)顯像實驗打下了良好的基礎。
　　第二部分靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑的體外尋靶及顯影研究
　　目的：觀察所制備的靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑的體外尋靶能力及光聲/超聲顯影效果。
　　方法：制備出DiI標記的靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑(Vi-PFH-PLGA)，激光共聚焦顯微鏡下觀察V

5、i-PFH-PLGA與體外培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)的結合情況，并設置非靶向組及游離抗體封閉組進行對照，評價其體外尋靶能力。采用近紅外光輻照靶向造影劑2min后,光聲成像儀下采集Vi-PFH-PLGA經近紅外光輻照前后的光聲、超聲及造影模式圖，并設置單純的印度墨水(ink組)和單純的液態(tài)氟碳納米粒（PFH-PLGA組）進行對照，評價其體外雙模態(tài)顯影效果。
　　結果：體外尋靶能力實驗顯示，激光共聚焦顯微鏡下可見較多的Vi-

6、PFH-PLGA呈花環(huán)狀牢固的聚集在人臍靜脈內皮細胞HUVEC表面，而非靶向組和抗體干預組未見造影劑與HUVEC的特異性結合。體外光聲/超聲顯影實驗顯示，Vi-PFH-PLGA可檢測到明顯的光聲信號,經近紅外光輻照后其超聲信號較輻照之前明顯增高(P<0.05)，且信號強度明顯高于ink組和PFH-PLGA組(P<0.05)。
　　結論：靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑與HUVEC細胞具有較強的靶向結合能力并具備較好的光聲/超