靶向納米脂質(zhì)微泡超聲造影劑體外尋靶及增強(qiáng)兔VX2腫瘤顯像的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分、靶向納米脂質(zhì)微泡超聲造影劑的制備及體外實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：制備一種載細(xì)胞間粘附因子-1(ICAM-1)單克隆抗體的納米脂質(zhì)超聲造影劑，研究其體外尋靶能力。
　　方法：采用機(jī)械震蕩法制得普通納米脂質(zhì)超聲造影劑和生物素化的納米脂質(zhì)超聲造影劑，利用生物素-親和素橋接法將ICAM-1抗體連接于納米脂質(zhì)超聲造影劑上，制成靶向造影劑，分別檢測(cè)兩種造影劑的物理性質(zhì)。經(jīng)TNF-α處理的HUVEC細(xì)胞定義為刺激組(S-HUVEC)細(xì)

2、胞，未經(jīng)處理的細(xì)胞定義為對(duì)照組(C-HUVEC)細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)HUVEC細(xì)胞上ICAM-1熒光表達(dá)強(qiáng)度。根據(jù)不同的處理因素，分為以下四組:①對(duì)照組細(xì)胞+普通造影劑組(C+P)②對(duì)照組細(xì)胞+靶向造影劑組(C+P-Ab)③刺激組細(xì)胞+普通造影劑組(S+P)④刺激組細(xì)胞+靶向造影劑組(S+P-Ab)。用熒光顯微鏡觀察各組造影劑與HUVEC細(xì)胞靶向結(jié)合的情況。
　　結(jié)果：普通造影劑粒徑為（623.21±91.37）nm;靶向造影劑

3、粒徑為（760.61±145.02）nm。RT-PCR分析結(jié)果顯示，刺激組(S-HUVEC)ICAM-1基因的表達(dá)量為對(duì)照組(C-HUVEC)的2倍。熒光顯微鏡下，C+P組和S+P組均未見造影劑粘附在HUVEC細(xì)胞周圍;而C+P-Ab組可見少量造影劑粘附于細(xì)胞上，S+P-Ab組可見大量的造影劑聚集在細(xì)胞膜上。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功制備載ICAM-1抗體的靶向納米脂質(zhì)超聲造影劑，同時(shí)模擬活體肝癌組織高表達(dá)ICAM-1的生物特性，證實(shí)

4、該靶向造影劑是一種良好的肝癌靶向造影劑。
　　第二部分、靶向納米脂質(zhì)微泡超聲造影劑對(duì)兔VX2腫瘤模型的體內(nèi)顯像研究
　　目的：制備載細(xì)胞間粘附因子-1(ICAM-1)單克隆抗體的納米脂質(zhì)微泡造影劑，研究其對(duì)兔VX2腫瘤模型的靶向顯影情況。
　　方法：采用機(jī)械震蕩法制得納米脂質(zhì)微泡，生物素-親和素橋接法將ICAM-1抗體連接于納米脂質(zhì)微泡上，制成靶向造影劑。建立兔VX2肝癌模型，分別將兩種造影劑以1ml/Kg的劑量從兔耳

5、緣靜脈注入，分別于90S內(nèi)每隔10S采集圖像1次，90 S-150 S內(nèi)每隔30 S采集圖像1次，共150 S，采集圖像12次。用DFY-Ⅱ超聲圖像分析診斷儀對(duì)兔肝癌回聲時(shí)間-強(qiáng)度曲線進(jìn)行定量分析，評(píng)價(jià)其顯影效果。
　　結(jié)果：對(duì)照組的達(dá)峰時(shí)間為20 S，峰值強(qiáng)度均值為67.88±4.29 dB，靶向組的達(dá)峰時(shí)間為30 S，峰值強(qiáng)度均值為107.34±4.40 dB。對(duì)照組20 S時(shí)腫瘤組織與周邊正常肝組織差值達(dá)正峰值，為63.84