構(gòu)建攜sialyl lewisx脂質(zhì)微泡超聲造影劑及其靶向顯影實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文從以下兩部分進(jìn)行了闡述。
　　第一部分?jǐn)ysialyl lewisx超聲造影劑的構(gòu)建及體外尋靶實(shí)驗(yàn)研究.
　　目的：構(gòu)建攜sialyl lewisx的靶向脂質(zhì)微泡超聲造影劑，體外評(píng)價(jià)其靶向黏附性能。
　　方法：采用“生物素-親和素”橋連法制備攜sialyl lewisx的靶向超聲脂質(zhì)微泡(MBs)，檢測(cè)普通脂質(zhì)微泡與靶向脂質(zhì)微泡的一般物理特性，觀察配基與脂質(zhì)微泡結(jié)合情況及結(jié)合率。建立經(jīng)腫瘤壞死因子(TNF-α)刺激處

2、理的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)炎癥模型，熒光半定量分析細(xì)胞的p-選擇素的表達(dá)情況。普通光鏡下觀察攜sialyllewisx脂質(zhì)微泡及普通脂質(zhì)微泡與“炎癥”人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外靶向黏附能力。
　　結(jié)果：sialyl lewisx能與脂質(zhì)微泡高效連接，結(jié)合率為93.93％，微泡大小較均一，平均粒徑為1.63±0.23μm，形態(tài)規(guī)則呈球形，分散度好，無(wú)粘連聚集，與普通超聲造影劑比較無(wú)明顯差異;激光共聚焦熒光顯微鏡見(jiàn)TNF-α刺激后

3、的HUVEC胞漿內(nèi)及細(xì)胞膜上p-選擇素表達(dá)明顯增高。攜sialyl lewisx脂質(zhì)微泡大量黏附于“炎癥”HUVEC表面三組對(duì)照組中未見(jiàn)微泡與HUVEC結(jié)合。
　　結(jié)論：成功構(gòu)建出攜sialyl lewisx脂質(zhì)微泡超聲造影劑，該靶向聲學(xué)造影劑能與炎癥狀態(tài)下的HUVEC高效、特異性結(jié)合，為動(dòng)物體內(nèi)血管早期炎癥病變的超聲分子顯影奠定了基礎(chǔ)。
　　第二部分?jǐn)ysialyl lewisx超聲造影劑體內(nèi)靶向顯影動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。
　

4、　目的：評(píng)價(jià)構(gòu)建的攜sialyl lewisx超聲造影劑(MBs)在體內(nèi)血管內(nèi)膜炎癥的靶向分子顯影能力。
　　方法：采用機(jī)械振蕩法制備生物素化的脂質(zhì)微泡(MBb)及攜sialyl lewisx靶向微泡超聲造影劑(MBs)，激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察及檢測(cè)靶向微泡的連接情況。經(jīng)股動(dòng)脈以球囊機(jī)械拉傷術(shù)建立大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)膜炎癥損傷模型，免疫組化檢測(cè)損傷的血管內(nèi)膜P-選擇素表達(dá)，16只350 g～400 gSD大鼠，隨機(jī)分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組

5、，模型建立前后經(jīng)尾靜脈，分別給予對(duì)照組MBb、實(shí)驗(yàn)組MBs超聲造影劑，行對(duì)比超聲檢查，DFY定量診斷儀分析圖像視頻強(qiáng)度及持續(xù)顯影時(shí)間，比較2組造影劑顯影特點(diǎn)。
　　結(jié)果：成功制備攜sialyl lewisx靶向超聲造影劑及大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)膜炎癥損傷模型，免疫組化可見(jiàn)損傷的血管內(nèi)膜P-選擇素大量表達(dá)。建模前，2種造影劑顯影結(jié)果無(wú)明顯差異;建模后，靶向造影劑與普通造影劑相比較，內(nèi)膜視頻強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，且顯影時(shí)間明顯延長(zhǎng)(p均＜0.05)。