靶向卵巢癌的納米脂質(zhì)微泡造影劑的制備及體外尋靶研究.pdf

1、目的:
　　制備一種靶向卵巢癌的新型納米脂質(zhì)微泡造影劑,鑒定理化特性及其對(duì)卵巢癌細(xì)胞的靶向性,為實(shí)現(xiàn)腫瘤血管外顯影研究提供了一個(gè)前期基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.將一定比例的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、生物素化二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-Biotin)及甘油、PBS等混合均勻,采用冷凍干燥法、機(jī)械振蕩法制備非靶向脂質(zhì)微泡造影劑。
　　2.光鏡下觀察微泡形態(tài)分散度、均一性,Zeta檢測(cè)儀檢測(cè)粒

2、徑大小范圍。
　　3.將一定比例的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、生物素化二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-Biotin)及甘油、PBS等混合均勻,采用冷凍干燥法、機(jī)械振蕩法、生物素-親和素-生物素橋連法,制備非靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑,將生物素化的促黃體生成素釋放激素(luteinzing hormone-releasing hormone, LHRH)抗體與非靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑連接,制備出卵巢癌靶向的納米脂質(zhì)微

3、泡造影劑。
　　4.光鏡下觀察微泡形態(tài)分散度、均一性及濃度以及室溫下保存時(shí)間,Zeta檢測(cè)儀檢測(cè)粒徑大小范圍、表面電位。
　　5.流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)非靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑、靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑與二抗結(jié)合率。
　　6.光鏡下觀察靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑與人卵巢癌OVCAR-3細(xì)胞結(jié)合情況。
　　7.預(yù)先用生物素化LHRH抗體與人卵巢癌OVCAR-3細(xì)胞飽和結(jié)合,再次觀察靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑與人卵巢癌OVCAR-

4、3細(xì)胞結(jié)合情況。
　　結(jié)果:
　　1.非靶向脂質(zhì)微泡造影劑是一種乳白色混懸液,400倍光鏡觀察及Zeta檢測(cè)儀檢測(cè)機(jī)械振蕩60s、90s、120s,微泡分布均勻,無(wú)團(tuán)聚,單個(gè)微泡的外觀圓整,粒徑范圍粒徑范圍分別為329~1008nm,295~468nm,369~618nm,157~268nm,400倍光鏡及觀察Zeta檢測(cè)儀檢測(cè)機(jī)械振蕩150s,微泡分布不均勻,無(wú)團(tuán)聚,單個(gè)微泡的外觀圓整,粒徑范圍60~896nm。
　

5、　2.非靶向納米級(jí)脂質(zhì)微泡造影劑和靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑微泡成功制備,兩種微泡的外觀圓整,分布均勻。Zeta檢測(cè)儀檢測(cè)粒徑范圍分別為295~468nm和369~618nm,集中于360nm與508nm,兩者粒徑大小比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05
　　3.光鏡下觀察,微泡形狀分散均勻和室溫保存時(shí)間長(zhǎng)。兩種微泡電位均為-14.6 mV。室溫下保存7d時(shí),靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑理化特性與剛制備時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　

6、4.二抗與非靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑、靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑結(jié)合率分別為0.83％、75.6%。
　　5.光鏡下OVCAR-3細(xì)胞周圍可見靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑圍繞或黏附,呈花環(huán)樣結(jié)構(gòu)。
　　6.光鏡下生物素化的LHRH抗體預(yù)先阻斷OVCAR-3細(xì)胞不能與靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑結(jié)合。
　　結(jié)論:
　　1機(jī)械振蕩90s為制作非靶向脂質(zhì)微泡造影劑最佳時(shí)間,即為制備非靶向納米脂質(zhì)微泡機(jī)械振蕩時(shí)間。
　　2.通過(guò)冷凍