FGFR2、VEGFR2和c-Cbl在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、胃癌是嚴(yán)重危害人類健康的最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居所有惡性腫瘤的第4位，死亡率位列所有腫瘤的第2位。長期以來包括手術(shù)切除及其他綜合性治療的應(yīng)用，并沒有帶來滿意的生存率，胃癌迄今仍是全球人口主要癌癥死亡原因，在中國與其它東亞國家尤其重要。 隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的深入為腫瘤的藥物治療提供了一種新的模式：分子靶向治療。靶向治療制劑的高效低毒特性越來越引起臨床醫(yī)師的重視，目前分子靶向藥物的發(fā)展，大多集中在與細(xì)胞生長、分化以及各種

2、細(xì)胞凋亡調(diào)控機(jī)制相關(guān)的信號傳導(dǎo)路徑，這些信號傳導(dǎo)路徑多是通過一些酪氨酸激酶的活化來調(diào)控。成纖維細(xì)胞生長因子2型受體(FGFR2)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子2型受體(VEGFR2)均是受體型酪氨酸激酶，研究表明FGFR2和VEGFR2與腫瘤血管的形成密切相關(guān)，與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及療效密切相關(guān)，同時(shí)它們在分子靶向治療中發(fā)揮重要作用；c-Cb1最近被證明是泛素-蛋白酶體通路中的一個(gè)新的RING Finger型泛素連接酶(E3)。c-Cb1可

3、以介導(dǎo)受體酪氨酸激酶的降解，因此參與細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)控機(jī)制。 國內(nèi)外尚未見對于胃癌中FGFR2、VEGFR2和c-Cb1的表達(dá)及其相關(guān)性的研究，本研究構(gòu)建胃癌組織芯片，應(yīng)用免疫組化的方法，檢測三種蛋白的表達(dá)情況，分析其與臨床病理特征的關(guān)系，以及三者相互之間的聯(lián)系，旨在探討FGFR2、VEGFR2和c-Cb1在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。 材料與方法: 1、組織標(biāo)本 共有124例來自于中國醫(yī)科大學(xué)附屬

4、第一醫(yī)院及遼寧省腫瘤醫(yī)院2005年10月～2006年8月手術(shù)切除的胃癌(術(shù)前未行化放療)組織標(biāo)本。其中男性92例，女性32例；年齡24～85歲，中位年齡60歲；病理均為腺癌，高分化11例，中分化29例，低分化84例；侵犯肌層76例，侵犯漿膜層48例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移100例，未發(fā)生轉(zhuǎn)移24例。胃癌組織分期采用國際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年修訂的P-TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：T1腫瘤局限于粘膜層或粘膜下層，T2腫瘤侵及肌層，T3腫瘤侵及漿膜下，T4

5、腫瘤穿透漿膜或侵犯周圍器官；其中Ⅰ期17例，Ⅱ期46例，Ⅲ期37例，Ⅳ期24例。124例胃癌組織取其中24例距胃癌組織5厘米以遠(yuǎn)的正常胃組織作為對照。 2、試劑 兔抗人FGFR2多克隆抗體購自ABCAM公司；兔抗人VEGFR2多克隆抗體購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；鼠抗人c-Cb1單克隆抗體購自BD公司；S-P檢測試劑盒、DAB顯色液均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。 3、方法 將124例胃癌組織與

6、24例正常胃組織標(biāo)本制作成組織芯片，采用免疫組化S-P法，按照S-P檢測試劑盒說明書所示步驟進(jìn)行，F(xiàn)GFR2、VEGFR2切片經(jīng)檸檬酸緩沖液(PH=6.0)微波抗原修復(fù)，c-Cb1無需抗原修復(fù)，組織芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。 4、免疫組化結(jié)果 判定FGFR2、VEGFR2和c-Cb1均以胞膜和/或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色，于顯微鏡400倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)有代表性的不同區(qū)域，每個(gè)視野的得分由陽性細(xì)胞的比例和

7、顯色強(qiáng)度兩方面決定，依照陽性細(xì)胞比例：<5％、5％-25％、25％-50％、50％-75％、>75％分別得0分、1分、2分、3分、4分；依照顯色強(qiáng)度：未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別得0分、1分、2分、3分；將兩項(xiàng)得分相乘得到該視野的最終得分，選取的5個(gè)視野得分的平均值為最后得分。最后該切片按照得分分為以下四個(gè)等級：0-1分為(-)，2-4分為(+)，5-7分(++)，≥8分(+++)。 (-)為陰性， (+)為弱陽性表達(dá)， (++)

8、～(+++)為強(qiáng)陽性表達(dá)。 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 以SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。應(yīng)用四格表x2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法；采用Mann-Whitney U非參數(shù)檢驗(yàn)和Spearman等級相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1、FGFR2、VEGFR2和c-Cbl在胃癌組織中的表達(dá) FGFR2、VEGFR2和c-Cbl在胃癌組織中的陽性表達(dá)率分別為77.4％、85.5％、71

9、.0％，均為高水平表達(dá)。 2、胃癌組織中FGFR2、VEGFR2和c-Cbl的表達(dá)情況與臨床病理因素的關(guān)系 FGFR2蛋白表達(dá)與浸潤深度及病理分期有關(guān)，且隨浸潤程度加深及病理分期變晚而表達(dá)增強(qiáng),而與性別、年齡、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)；VEGFR2蛋白表達(dá)與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期有關(guān)，且隨浸潤程度加深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期變晚而表達(dá)增強(qiáng)，而與性別、年齡、分化程度無關(guān)；c-Cbl蛋白表達(dá)與浸潤深度及病理分期有關(guān)，且

10、隨浸潤程度加深及病理分期變晚而表達(dá)增強(qiáng),而與性別、年齡、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。 3、胃癌組織中FGFR2、VEGFR2和c-Cbl表達(dá)之間的相關(guān)性 FGFR2與c-Cbl的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)及P值分別為r=0.465，P=0.000;VEGFR2與c-Cbl的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)及P值分別為r=0.190，P=0.035。 4、胃癌組織中FGFR2、VEGFR2和c-Cbl蛋白均強(qiáng)陽性表達(dá)與臨床

11、病理特征之間的關(guān)系124例胃癌組織病理標(biāo)本中共有26例三種蛋白同時(shí)呈強(qiáng)陽性表達(dá)，在分化程度差，腫瘤組織浸潤程度深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目多及分期晚的病例中更多見。 結(jié)論: 1、FGFR2、VEGFR2和c-Cb1在胃癌中高表達(dá)；FGFR2及c-Cbl蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與胃癌的浸潤深度及病理分期均呈正相關(guān)；VEGFR2的表達(dá)強(qiáng)度與胃癌的浸潤深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期呈正相關(guān)；三者同時(shí)強(qiáng)陽性表達(dá)更多見于分化差，浸潤程度深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目