洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表達研究.pdf

1、洛克沙胂是國內外廣泛使用的一種有機胂飼料添加劑，近來的研究表明其能促進人血管內皮細胞生長，存在著促血管生成作用及潛在的致癌風險。血管內皮生長因子(VEGF)是目前已知的最重要的血管生長調節(jié)因子。目前國內外有關洛克沙胂促血管生成作用及其VEGF的調控研究還基本是空白。本研究擬通過基質膠塞血管生長模型、對內皮細胞的生長影響來研究洛克沙胂體內外促血管生長作用及對VEGF表達的影響，為探討洛克沙胂可能的特殊毒性及潛在的致癌風險研究積累基本資料，

2、也為洛克沙胂作為飼料添加劑在畜禽生產中使用安全性的研究有積極意義。
　　基質膠塞模型實驗中，劑量設置分別為洛克沙胂0.10μM、1.00μM、10.00μM，10 ng/mL采用VEGF為陽性對照，PBS為陰性對照。內皮細胞經過不同的處理后注射于ICR小鼠的皮下，10天后檢測形成膠塞的體積、重量及血紅蛋白的含量。結果表明，洛克沙胂處理各組膠塞體積、重量及血紅蛋白含量均明顯大于PBS對照組（P＜0.05）;洛克沙胂在0.10μM～1

3、.00μM范圍內，隨劑量增加基質膠塞體積、重量和血紅蛋白的含量隨之升高，但10.00μM洛克沙胂劑量組膠塞的體積、重量和血紅蛋白的含量反而減小，且均小于1.00μM。1.0μM洛克沙胂組的血紅蛋白含量與VEGF組相當。
　　大鼠內皮細胞培養(yǎng)試驗中，劑量組分別為10.00μM、1.00μM、0.10μM、0.01μM洛克沙胂，1.00μM+Anti-FLT、1.00μM+Anti-KDR，及Anti-FLT、Anti-KDR、Ant

4、i-VEGF和PBS對照組。內皮細胞培養(yǎng)6h后，MTT法檢測細胞的活力;ELISA法檢測培養(yǎng)上清中VEGF的量;Werstern Blot檢測細胞中VEGF的表達。管形成試驗評價洛克沙胂形成血管的能力。
　　MTT的結果表明，0.10～10.00μM洛克沙胂處理及VEGF組細胞活力顯著高于PBS對照(P＜0.05），1.00μM組OD值最高;1.00μM+Anti-KDR組顯著低于1.00μM組(P＜0.05）;1.00μM+An

5、ti-FLT組與1.00μM組無顯著差異(P＞0.05); Anti-KDR和Anti-VEGF組顯著低于PBS對照(P＜0.05），而Anti-FLT與PBS無顯著差異(P＞0.05）。結果表明洛克沙胂具有明顯的促內皮細胞生長的作用，且1.00μM促生長能力最強;洛克沙胂促內皮細胞生長明顯與VEGF、KDR有關。
　　內皮細胞管形成試驗中，0.01μM、0.10μM、1.00μM、10.00μM洛克沙胂處理組形成的管數顯著高于P

6、BS對照組;0.01～1.0μM范圍內，隨劑量增加形成的管數增加，1.00μM組最高，10.00μM組反而減少。
　　內皮細胞不同處理后培養(yǎng)上清中VEGF含量測定表明，0.10μM、1.00μM、10.00μM洛克沙胂組顯著高于PBS對照組(P＜0.05)，且1.0μM組最高;1.00μM+Anti-KDR組顯著高于1.00μM組(P＜0.05);1.00μM+Anti-FLT組與1.00μM組無顯著差異(P＞0.05）;而Ant

7、i-KDR和Anti-FLT分別低于1.00μM+Anti-KDR和1.00μM+Anti-FLT組。表明洛克沙胂可刺激內皮細胞分泌VEGF，阻斷受體FLT對細胞上清中VEGF的濃度無明顯影響，而KDR阻斷后使培養(yǎng)液中VEGF的濃度明顯上升。Western Blot檢測表明0.10μM、1.00μM、10.00μM洛克沙胂組的VEGF表達均顯著高于PBS對照，且1.00μM組表達最強。
　　綜上所述，洛克沙胂在0.1～10.00μ