激光顯微捕獲切割技術(shù)在脫落細(xì)胞類(lèi)檢材中的方法學(xué)建立及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　 本課題旨在建立一套適于脫落細(xì)胞檢測(cè)的激光顯微捕獲切割技術(shù)(LaserCaptureMicrodissection，LCM)的方法，并對(duì)該方法在脫落細(xì)胞類(lèi)檢材特別是降解的脫落細(xì)胞樣本檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)行探索性研究。
　　 方法：
　　 1、以口腔上皮脫落細(xì)胞為模型，從染色方法、提取方法、循環(huán)參數(shù)等方面進(jìn)行比較研究，建立LCM方法。
　　 2、以酸性飲料和口腔上皮細(xì)胞混合物為研究對(duì)象，對(duì)Chelex

2、-100法、Chelex-100與Microcon100相結(jié)合法、DNAIQTM提取法等不同方法分別與LCM方法進(jìn)行比較研究。
　　 3、以尿液中脫落細(xì)胞為研究對(duì)象，對(duì)目前法庭科學(xué)常用檢測(cè)方法與LCM方法進(jìn)行比較研究。
　　 結(jié)果：
　　 1、利用本實(shí)驗(yàn)所建立的LCM方法捕獲10個(gè)口腔上皮細(xì)胞，即可獲得完整的DNA分型，重復(fù)性較好，為法醫(yī)實(shí)際案件中微量生物檢材的DNA檢驗(yàn)提供了一種參考方法。
　　 2、酸

3、性飲料和口腔上皮細(xì)胞混合物僅采用Chelex-100法或與Microcon100相結(jié)合，難以獲得較高質(zhì)量的DNA，從而難以獲得較滿意的檢測(cè)結(jié)果；對(duì)于檸檬酸類(lèi)混合物，可直接采用DNAIQTM提取法提取，并可以通過(guò)減小洗脫體積，提高DNA濃度，從而提高DNA的檢出率；乳酸類(lèi)富含蛋白質(zhì)的混合物，可考慮采用LCM法，將靶細(xì)胞從復(fù)雜環(huán)境中分離，更利于獲得較好的檢測(cè)結(jié)果。
　　 3、新鮮尿液組：采用LCM技術(shù)提取的DNA在所有基因座上均獲得

4、較滿意的結(jié)果，而采用Chelex-100提取法提取的DNA在各基因座上存在等位基因丟失、非特異性擴(kuò)增、峰值低等問(wèn)題；儲(chǔ)存尿液組：4℃儲(chǔ)存10天以內(nèi)和室溫儲(chǔ)存4天以內(nèi)的尿液采用LCM技術(shù)聯(lián)合DNAIQTM提取法的均可明確判讀12個(gè)以上基因座；而采用Chelex-100提取法未獲得有效分型。
　　 結(jié)論：
　　 LCM法為脫落細(xì)胞類(lèi)檢材，特別是降解的脫落細(xì)胞的DNA檢測(cè)提供了一種有效的方法，同時(shí)也為其他種類(lèi)的微量生物檢材的檢