基于iTRAQ技術(shù)炎癥刺激下成骨細(xì)胞分化相關(guān)蛋白組學(xué)分析及藥靶蛋白Elp2功能初步研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 1 級(jí)博士學(xué)位論文基于i T R A Q 技術(shù)炎癥刺激下成骨細(xì)胞分化相關(guān)蛋白組學(xué)分析及藥靶蛋白E l p 2 功能初步研究P r o t e o m e a n a l y s i so f i n f l a m m a t i o n o no s t e o b l a s td i f f e r e n t i a t i o nb y i T R A Q a n d p r e l i m i n a

2、 r yf u n c t i o n a l s t u d i e so fE L P 2 a s ad r u g t a r g e t課題來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目( N O ．8 12 7 2 0 5 2 )廣東省自然科學(xué)基金( N O ．$ 2 0 1 1 0 1 0 0 0 3 8 5 5 )專 業(yè) 名 稱學(xué)位申請(qǐng)人指 導(dǎo) 教 師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員骨外科學(xué)許長(zhǎng)鵬余斌 教授( 主任醫(yī)師、博士生導(dǎo)師)白 波 教

3、授歐陽(yáng)鈞教授倪國(guó)新教授2 0 1 4 年4 月2 0 日 廣州摘要的促炎性細(xì)胞因子之一，T N F ．C 【除參與介導(dǎo)免疫應(yīng)答外，還通過(guò)誘導(dǎo)局部炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)外周組織細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和功能活性影響組織器官的發(fā)育和功能。而T N F —O t 對(duì)成骨細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)則表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：( 1 ) T N F ．O t直接抑制成骨細(xì)胞的分化成熟及成骨；( 2 ) T N F ．僅刺激成骨細(xì)胞分泌破骨性調(diào)節(jié)因子進(jìn)而促進(jìn)骨吸收；( 3 )

4、 T N F ．0 【誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡、減少其數(shù)目從而抑制骨形成；( 4 ) T N F ．O t 影響其他促分化細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子對(duì)成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。體外實(shí)驗(yàn)?zāi)壳耙炎C實(shí)T N F ．。c 可抑制成骨細(xì)胞關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子如R u n x 2 和O s t e r i x 因子的表達(dá)。其中T N F ．O t 對(duì)R u n x 2 的抑制作用主要通過(guò)造成R u n x 2 m R N A 的失穩(wěn)定進(jìn)而影響細(xì)胞凋亡；并且T N F ．0 【

5、還通過(guò)對(duì)成骨細(xì)胞內(nèi)的S m u r f l 和S m u r f 2 因子的增量調(diào)節(jié)來(lái)促進(jìn)R u n x 2 的降解。而T N F ．僅對(duì)O s t e r i x 抑制則通過(guò)獨(dú)立的機(jī)制，即通過(guò)包括M A P K ，神經(jīng)酰胺和氧自由基等信號(hào)傳導(dǎo)通路間接抑制O s t e r i x 活性，進(jìn)而抑制成骨細(xì)胞分化。盡管如此，T N F ．O t 抑制成骨細(xì)胞的機(jī)制復(fù)雜仍不甚清楚。因此探索炎癥刺激影響成骨細(xì)胞分化的機(jī)制，尋找潛在的理想藥靶阻止

6、炎癥因子對(duì)骨再生的抑制，一直是該研究領(lǐng)域密切關(guān)注并亟待解決的問(wèn)題。蛋白質(zhì)組學(xué)在成骨分化研究方面的研究炎癥刺激作用下成骨細(xì)胞分化的過(guò)程存在復(fù)雜精密的調(diào)節(jié)體系，涉及諸多信號(hào)通路的調(diào)控?？紤]到信號(hào)通路之間存在的交談( c r o s s t a l k ) 作用，加之既往研究多通過(guò)某一條或某幾條通路入手，因此難以全面地解釋成骨細(xì)胞在炎癥刺激作用下的分化過(guò)程。同時(shí)前期的研究多數(shù)通過(guò)單個(gè)靶點(diǎn)阻斷單一信號(hào)通路干預(yù)炎癥對(duì)成骨細(xì)胞分化的抑制。而多靶點(diǎn)組

7、成的靶場(chǎng)干預(yù)應(yīng)該是阻止炎癥因子對(duì)骨再生抑制的發(fā)展方向。只有通過(guò)對(duì)炎癥刺激影響成骨細(xì)胞分化的機(jī)制深入了解，發(fā)現(xiàn)潛在的特異性和可藥性靶標(biāo)，才能做到有的放矢，針對(duì)組合靶標(biāo)開發(fā)新的促進(jìn)炎癥刺激下成骨細(xì)胞分化的藥物。后基因組時(shí)代，蛋白質(zhì)作為生物功能的執(zhí)行者已經(jīng)成為生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。蛋白質(zhì)組學(xué)是對(duì)機(jī)體、組織或細(xì)胞的全部蛋白質(zhì)的表達(dá)水平、蛋白修飾與功能、蛋白之間的相互作用等進(jìn)行高通量的篩選和分析，比傳統(tǒng)的單個(gè)基因研究或單個(gè)蛋白研究更能增加疾病診