鋅-JAZF1調(diào)控TR4在DEHP致青春期大鼠精子發(fā)生障礙中作用.pdf

1、目的：
　　本研究以鄰苯二甲酸二乙基己基酯(Di-2-ethylhexyl phthalate，DEHP)為受試物，以青春期雄性大鼠為研究對(duì)象，研究DEHP的生殖毒性以及鋅/JAZF1調(diào)控TR4在DEHP致精子發(fā)生障礙中的作用及部分機(jī)制。
　　方法：
　　1、將32只健康40日齡清潔級(jí)雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為4組，分別為溶劑對(duì)照（玉米油）組和250、500、1000 mg/kg DEHP染毒組，每組8只。采用灌胃方式

2、進(jìn)行染毒，染毒容量為10 ml/kg，每天1次，連續(xù)染毒4周。
　　2、大鼠處死后收集標(biāo)本，采用組織學(xué)方法分析各組睪丸組織支持細(xì)胞、各級(jí)生精細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)改變;TUNEL染色法檢測(cè)睪丸細(xì)胞凋亡指數(shù);采用CASA精子分析系統(tǒng)分析記錄精子活力的運(yùn)動(dòng)參數(shù);采用紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)睪丸勻漿液中SOD、MDA和GSH-Px的含量變化;采用火焰原子吸收分光光度法檢測(cè)睪丸組織中鋅含量;提取睪丸組織總RNA，用Real-TimePCR

3、檢測(cè)基因JA ZF1、TR4的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、體重變化和臟器系數(shù)
　　隨著染毒時(shí)間延長(zhǎng)，1000 mg/kg DEHP染毒組大鼠體重降低(P＜0.05);染毒可不同程度導(dǎo)致大鼠睪丸重量及臟器系數(shù)明顯下降（睪丸萎縮）、肝臟系數(shù)增加（肝腫大）、腎臟系數(shù)減少（腎萎縮）。
　　2、精子活力
　　與對(duì)照組比較，1000 mg/kg DEHP染毒組大鼠的精子密度、直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)的精子密度均降低;250 m

4、g/kg DEHP染毒組A級(jí)精子比例、平均直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)速度、平均路徑速度、平均鞭打頻率、運(yùn)動(dòng)的直線(xiàn)性、直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)精子活率、精子運(yùn)動(dòng)的向前性均降低;250、1000 mg/kg DEHP染毒組直線(xiàn)運(yùn)動(dòng)的精子個(gè)數(shù)均較低;250、500 mg/kg DEHP染毒組活動(dòng)精子密度升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而各劑量DEHP染毒組B、C級(jí)精子比例和平均曲線(xiàn)運(yùn)動(dòng)速度、平均路徑速度、平均側(cè)擺幅度、運(yùn)動(dòng)的擺動(dòng)性、平均移動(dòng)角度均無(wú)明顯改變。

5、　　3、睪丸組織病理形態(tài)
　　光鏡下觀(guān)察HE染色可見(jiàn)DEHP染毒組可以不同程度的引起睪丸曲精小管、生精細(xì)胞、支持細(xì)胞的改變受損。
　　4、睪丸組織細(xì)胞凋亡指數(shù)
　　隨著染毒劑量逐漸增加，各染毒組睪丸組織細(xì)胞凋亡指數(shù)均升高(P＜0.05);光鏡下觀(guān)察TUNEL染色陽(yáng)性的異常凋亡細(xì)胞以精原細(xì)胞和精母細(xì)胞為主，伴有少量的支持細(xì)胞。
　　5、睪丸組織氧化應(yīng)激
　　與對(duì)照組(0 mg/kg)相比較，各個(gè)染毒組SOD活

6、力下降(P＜0.05);各個(gè)染毒組MDA含量升高(P＜0.05);250 mg/kg劑量組GSH-Px活力下降(P＜0.05)。
　　6、睪丸組織鋅含量和JAZF1、TR4的mRNA表達(dá)水平
　　(1)與對(duì)照組(0 mg/kg)相比較，1000mg/kg劑量染毒組睪丸組織中鋅的含量降低(P＜0.05)。(2)與對(duì)照組(0 mg/kg)相比較，1000mg/kg劑量組JAZF1mRNA表達(dá)水平升高(P＜0.05);1000mg