淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒GP2單克隆抗體的制備和鑒定.pdf

1、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)隸屬于沙粒病毒科家族，自然宿主是嚙齒類動(dòng)物，常見(jiàn)的如家鼠、寵物鼠、倉(cāng)鼠等都是它的天然攜帶者。它可以通過(guò)唾液、鼻分泌物、乳汁、精液、尿液和糞便使病毒得以傳播，也可以通過(guò)其它途徑，如皮膚、粘膜傷口、胎盤甚至病毒粒子氣溶膠的形式傳播。宿主感染了LCMV病毒后大都無(wú)明顯的癥狀，這就成為了LCMV可以大面積地隱匿性傳播的前提條件。人們很容易低估了LCMV感染的廣泛性。通過(guò)對(duì)LCMV的研究，人類在諸如T細(xì)胞的MH

2、C限制性、CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞在清除病毒過(guò)程中作用、T細(xì)胞耗竭、免疫耐受等方面取得了里程碑式的重大發(fā)現(xiàn)。其中的Armstrong和Cl-13兩個(gè)亞型因?yàn)榛蚪M的微小差異而引起宿主急慢性感染的巨大差異被眾多實(shí)驗(yàn)室作為模式病毒，深入地研究免疫系統(tǒng)對(duì)急慢性感染的病理變化以及對(duì)慢性感染的深入研究。目前對(duì)LCMV慢性感染的認(rèn)識(shí)也已經(jīng)擴(kuò)展到了HIV、結(jié)核病、乙肝、丙肝、自身免疫病和腫瘤的領(lǐng)域。而LCMV可以通過(guò)多種途徑實(shí)現(xiàn)動(dòng)物-人的傳播。

3、由于人類感染了LCMV病毒通常無(wú)明顯癥狀，或者出現(xiàn)輕微的非特異性癥狀而自愈，故導(dǎo)致人們很容易忽視它的存在。而在特定條件下，如妊娠、免疫功能低下或者器官移植時(shí)出現(xiàn)機(jī)會(huì)感染，對(duì)人類健康造成極大威脅。GP2是LCMV穿膜蛋白，位于LCMV粒子表面，同GP1共同起修飾病毒表面的作用，同時(shí)它在病毒感染宿主細(xì)胞時(shí)擔(dān)負(fù)了通過(guò)變構(gòu)而觸發(fā)病毒膜與細(xì)胞膜的融合功能。但目前國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室對(duì)于LCMV的檢測(cè)仍在使用免疫血清或者RT-PCR法，到目前為止暫未出現(xiàn)抗

4、LCMV GP2的單克隆抗體的商品，因此研發(fā)抗LCMV GP2的mAb在科研和臨床有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　目的：
　　本研究的目的是制備針對(duì)LCMV GP2的mAb，為開發(fā)酶標(biāo)或者熒光標(biāo)記的檢測(cè)抗體打下基礎(chǔ)，為以后的免疫治療提供可能;也可以利用該抗體親和純化GP2，從而進(jìn)一步研究其結(jié)構(gòu)和功能、LCMV疫苗的開發(fā)做好物質(zhì)準(zhǔn)備。
　　方法：
　　采用雜交技術(shù)獲得并篩選出雜交瘤細(xì)胞，收集含mAb的培養(yǎng)上清行免疫熒光(I

5、FA)、dot-blot、ELISA法鑒定抗體重鏈類型和測(cè)定mAb的免疫效價(jià)。用蛋白G Sepharose親和層析填料純化抗體，純化后的抗體采用SDS-PAGE檢測(cè)純化效果，并進(jìn)一步用Western-blot檢查抗體對(duì)LCMV的作用部位。
　　結(jié)果：
　　成功獲得能穩(wěn)定分泌抗LCMV的特異性雜交瘤細(xì)胞株，順利獲得純化的mAb。IFA、dot-blot結(jié)果均證實(shí)獲得的mAb能識(shí)別LCMV抗原。用ELISA法鑒定出該mAb重鏈類