基于OATPs-Oatps介導(dǎo)的參麥方效應(yīng)組分對(duì)麥冬皂苷D肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)的影響及其配伍機(jī)理研究.pdf

1、背景：
　　參麥方（參麥注射液）由生脈散化裁而來，臨床上廣泛用于慢性心衰、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、病毒性心肌炎等疾病的治療。麥冬皂苷D（OPD）為參麥注射液的主要活性成分之一。前期研究發(fā)現(xiàn)OPD經(jīng)OATPs/Oatps介導(dǎo)，SD大鼠分別尾靜脈給予參麥注射液或同等劑量的OPD后，前者血漿中OPD濃度明顯升高，血/肝濃度比值較大，提示參麥注射液復(fù)雜組分間可能存在著基于肝臟OATPs/Oatps介導(dǎo)的相互作用及相互影響機(jī)制。因此，有必

2、要系統(tǒng)探究參麥方中影響OPD肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)的物質(zhì)基礎(chǔ)，深入闡明并揭示中藥復(fù)雜組分基于肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的配伍規(guī)律與內(nèi)在機(jī)制，為中藥現(xiàn)代化研究提供新的方法與思路。
　　目的：
　　通過大鼠原代肝細(xì)胞模型、穩(wěn)定高表達(dá)OATP1B1、OATP1B3的HEK293T細(xì)胞模型及在體大鼠動(dòng)物模型，系統(tǒng)研究參麥方效應(yīng)組分及HPLC逐級(jí)分離組分對(duì)OPD肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，探究參麥方中影響OPD肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)的物質(zhì)基礎(chǔ)，闡明參麥方復(fù)雜組分基于OATPs/Oat

3、ps介導(dǎo)的相互作用及內(nèi)在配伍機(jī)制。
　　方法：
　　1、建立細(xì)胞破碎液及大鼠血漿中OPD的LC-MS檢測(cè)方法，用于OPD的濃度檢測(cè)。
　　2、分別通過大鼠原代肝細(xì)胞、OATP1B1-HEK293T及OATP1B3-HEK293T細(xì)胞模型系統(tǒng)研究參麥方主要效應(yīng)部位及效應(yīng)組分對(duì)OPD肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　3、采用HPLC逐級(jí)分離技術(shù)，在OATP1B1-HEK293T、OATP1B3-HEK293T細(xì)胞模型中逐層分析參

4、麥注射液初級(jí)分離組分及再分離組分對(duì)OPD肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　4、使用SD大鼠，分別尾靜脈注射OPD單組分或與陽(yáng)性結(jié)果組分Rb1、Rd配伍給藥，測(cè)定血漿中OPD藥物濃度，比較兩組大鼠體內(nèi)OPD藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)差異。
　　結(jié)果：
　　1、建立的細(xì)胞破碎液及大鼠血漿中OPD的LC-MS檢測(cè)方法專屬性較好，靈敏度較高，精密度與準(zhǔn)確度符合相關(guān)要求。
　　2、參麥方的主要效應(yīng)部位二醇型人參皂苷對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞、OATP1B1

5、-HEK293T及OATP1B3-HEK293T細(xì)胞中OPD的轉(zhuǎn)運(yùn)抑制作用較強(qiáng)，其IC50分別為0.94、1.39、0.46μΜ，而三醇型人參皂苷則對(duì)OPD的轉(zhuǎn)運(yùn)抑制作用較弱，其IC50分別為3.46、5.37、2.44μΜ；參麥方的主要效應(yīng)組分Rb1和Rd對(duì)OPD的轉(zhuǎn)運(yùn)抑制作用較強(qiáng)，Rb1對(duì)OPD的IC50分別為0.89、1.64、0.57μΜ， Rd對(duì)OPD的IC50分別為0.44、1.98、0.32μΜ，而Re和Rg1則對(duì)OPD的

6、轉(zhuǎn)運(yùn)抑制作用較弱，Re對(duì)OPD的IC50分別為4.80、35.89、10.71μΜ，Rg1對(duì)OPD的IC50分別為8.83、27.22、4.18μΜ。
　　3、參麥注射液HPLC初級(jí)分離組分SMI-2（30-45min）對(duì)OATP1B1-HEK293T及OATP1B3-HEK293T細(xì)胞中OPD轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制作用較弱，其IC50分別為19.25、3.39μΜ；SMI-3（45-62min）對(duì)OPD轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制作用較強(qiáng)，其IC50分別為1

7、.48、0.50μΜ，SMI-1（0-30min）及SMI-4（62-100min）則對(duì)OPD轉(zhuǎn)運(yùn)無明顯抑制作用。再分離組分SMI-3-1（0-10min）及SMI-3-3（15-20min）對(duì)OPD轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制作用較強(qiáng)，前者IC50分別為1.94、0.55μΜ，后者IC50分別為1.66、0.31μΜ；而SMI-3-2（11-15min）則對(duì)OPD的轉(zhuǎn)運(yùn)無明顯抑制作用。
　　4、SD大鼠分別給予OPD單組分或與Rb1、Rd配伍給藥

8、，后者體內(nèi)OPD的Cmax為前者的1.76倍，t1/2為前者的2.04倍，AUC、CL、MRT等藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均存在顯著性差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、參麥方的主要效應(yīng)部位二醇型人參皂苷能夠顯著抑制OPD的攝取，而三醇型人參皂苷則對(duì)OPD攝取抑制作用較弱，二醇型人參皂苷可能是參麥方復(fù)雜組分中影響OPD基于OATPs/Oatps介導(dǎo)肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)的主要效應(yīng)部位。
　　2、參麥方的主要效應(yīng)組分人參皂苷Rb1、Rd能夠顯