麥冬皂苷D誘導(dǎo)CYP2J產(chǎn)生抗心肌肥大機(jī)制研究.pdf

1、參麥注射液是中醫(yī)臨床常用且非常有效的心血管疾病治療藥物，本研究以其中重要有效單體成分之一麥冬皂苷D(OPD)為研究對(duì)象，對(duì)其減緩心肌肥大的藥理活性作用及可能機(jī)制進(jìn)行研究。結(jié)果顯示OPD可恢復(fù)細(xì)胞內(nèi)總抗氧化能力，抑制炎癥因子的釋放及抑制細(xì)胞凋亡，其對(duì)心肌肥大的干預(yù)作用還有待研究。心肌肥大是心血管疾病的主要危害因素，血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)或腎腹主動(dòng)脈結(jié)扎(RAS)可充分誘導(dǎo)心肌肥大，同時(shí)，NF-κB作為多種心血管疾病的中心介導(dǎo)因子，已被證

2、實(shí)抑制NF-κB可以緩解應(yīng)激壓力及心臟疾病，同時(shí)心肌肥大的發(fā)生需要NF-κB的參與。本實(shí)驗(yàn)從心肌肥大表征，驗(yàn)證OPD對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)性作用，通過(guò)細(xì)胞和動(dòng)物水平兩個(gè)層次，探討OPD的抗炎作用及與抗心肌肥大分子機(jī)制的關(guān)系。在實(shí)驗(yàn)室前期工作基礎(chǔ)上，驗(yàn)證參與廣泛心血管保護(hù)作用的cytochrome P450enzyme2J3(CYP2J3)的上調(diào)對(duì)心肌肥大的影響，以及與OPD介導(dǎo)的心肌保護(hù)的關(guān)系，為OPD心血管保護(hù)作用新的可能機(jī)制發(fā)現(xiàn)提供線索。

3、
　　細(xì)胞水平首先利用AngⅡ造心肌細(xì)胞肥大模型，分別用不同濃度OPD共處理，BCA法檢測(cè)總蛋白含量;qRT-PCR檢測(cè)肥大基因及炎癥相關(guān)基因mRNA表達(dá);Western blot檢測(cè)自噬蛋白及炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)，同時(shí)運(yùn)用高內(nèi)涵篩選技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞自噬蛋白LC3B，F(xiàn)-actin肌動(dòng)蛋白的表達(dá)以及線粒體膜電位的改變。通過(guò)敲低和過(guò)表達(dá)CYP2J3來(lái)檢測(cè)其在炎癥通路中的作用以及對(duì)OPD藥理作用的影響。進(jìn)一步在動(dòng)物整體水平上建立心肌肥大

4、模型，通過(guò)超聲心動(dòng)圖及病理切片檢測(cè)炎癥及肥大指標(biāo)，ELISA檢測(cè)Endothelin-1(ET-1)表達(dá)，以驗(yàn)證OPD的抗肥大效應(yīng)及機(jī)制。
　　結(jié)果顯示，麥冬皂苷D在較高濃度（50μM以上）具有一定的細(xì)胞毒性，較低濃度表現(xiàn)出良好的藥理活性。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示，OPD可以逆轉(zhuǎn)AngⅡ所誘導(dǎo)的肥大基因表達(dá)，總蛋白表達(dá)，自噬的增強(qiáng)以及線粒體膜電位的下降等肥大表征。OPD對(duì)促炎癥因子NF-κB相關(guān)蛋白有明顯的抑制作用，在CYP2J3過(guò)表達(dá)條件下

5、可得到相同的抑制效應(yīng)，但CYP2J3敲低后并不能完全削弱OPD的抗炎效果。動(dòng)物水平結(jié)果顯示，AngⅡ和腎動(dòng)狹窄造模后發(fā)生向心性肥大且OPD可以緩解動(dòng)物心肌肥大的病理狀態(tài)，有顯著的抗炎效應(yīng)。
　　綜上所述，研究首次證明了OPD通過(guò)抗炎作用緩解心肌肥大，且OPD通過(guò)抗炎通路發(fā)揮心血管保護(hù)作用部分通過(guò)OPD對(duì)CYP2J3誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)。炎癥與肥大密切相關(guān)，從在體和離體實(shí)驗(yàn)均提示OPD具有明顯的抗炎活性，該研究為OPD抗心肌肥大的可能機(jī)制和心血