抗氯霉素單克隆抗體的制備及一步式化學發(fā)光酶免疫分析方法的建立.pdf

1、氯霉素(Chloramphenicol，CAP)作為一種有效的廣譜抗生素，曾廣泛的應用于畜牧業(yè)。但由于氯霉素對人類具有嚴重的毒副作用，被世界各國明令禁止在食品動物中使用。為了嚴格控制氯霉素殘留情況，建立一種高效、靈敏、快速、特異的藥物殘留檢測技術成為當務之急?；瘜W發(fā)光酶免疫分析技術具有化學發(fā)光測定技術的高靈敏度與免疫反應的高特異性等優(yōu)點，適用于臨床檢測中所有酶免疫分析和放射免疫分析的檢測項目，是這兩種方法的替代升級產(chǎn)品，具有較好的發(fā)展前

2、景。
　　 本研究以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-HS-BSA)免疫BALB/c小鼠；三免后，以間接ELISA方法測定免疫小鼠的血清效價，均達到1:1.28×105，說明小鼠獲得了較好的免疫效果；取效價最高的免疫小鼠的血清進行間接競爭ELISA測定，血清半抑制濃度(IC50)在100～1000μg/L之間。
　　 采用細胞融合技術將效價最高的小鼠免疫脾細胞與Sp2/0細胞進行融合，融合率為22.9％。經(jīng)過間接E

3、LISA篩選，獲得分泌抗CAP的強陽性雜交瘤細胞株1株，經(jīng)克隆3次后，選擇細胞生長狀態(tài)良好，克隆陽性率達100％的細胞株，命名為5D7。
　　 對雜交瘤細胞培養(yǎng)上清進行了效價測定與亞類鑒定，分泌的抗體亞類為IgGl、k鏈，細胞培養(yǎng)上清效價為1:512。采用體內(nèi)誘生腹水的方法制備單克隆抗體，純化后對抗體進行了效價、親和性和特異性測定。結果顯示，腹水經(jīng)純化后效價為1:2×105，親和常數(shù)為3.6×108L/mo1，與L-苯丙氨酸、L

4、-酪氨酸、青霉素、四環(huán)素、慶大霉素等結構類似物及常見抗生素的交叉反應率小。
　　 利用制備的抗CAP單克隆抗體5D7建立了一步式檢測氯霉素的化學發(fā)光酶免疫分析法，并進一步優(yōu)化抗原包被條件、抗體工作濃度、競爭反應時間等實驗參數(shù)，獲得CLEIA的線性回歸方程為y=-12.188x+62.988，R2=0.9909，IC50=11.63μg/L，該方法顯示在0.001～10μg/L有較好的線性關系，檢出限為0.0061μg/L，回收率