血清胸苷激酶單克隆抗體酶促化學(xué)發(fā)光試劑盒的研制.pdf

1、分類號(hào)：17331密級(jí)：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位口冒學(xué)校代碼：10062學(xué)號(hào)：M20093003學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又肄眚科鼻號(hào)碩士學(xué)位論文Ⅳ【ASTER’SDISSERTATIoN論文題目：血清胸苷激酶單克隆抗體酶促化學(xué)發(fā)光試劑盒的研制TITLEThedevelopmentofthekitoftheenzymeChemiluminescencedetectionforserumthymidinekinasewithmonoclonala

2、ntibody一級(jí)學(xué)科：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：免疫學(xué)論文作者：趙群莉指導(dǎo)教師：鄧為民導(dǎo)師組成員：李宏釗天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的研制特異性強(qiáng)、靈敏度高的檢測(cè)STKl(血清胸苷激酶)的單克隆抗體酶促化學(xué)發(fā)光試劑盒，以用于腫瘤早期檢測(cè)、預(yù)后和術(shù)后觀察及臨床療效監(jiān)控。方法一制各一對(duì)抗STKl單克隆抗體。l抗體制備A設(shè)計(jì)并合成長(zhǎng)度為15個(gè)氨基酸的STKl多肽，并與載體蛋白KLH耦聯(lián)制備多肽抗原；B從Raf

3、t細(xì)胞提取物中純化獲得TKl抗原蛋白；c抗STKl多肽抗原單克隆抗體的制備：常規(guī)免疫Balb／c小鼠，選擇血清抗體滴度較高的小鼠，取脾細(xì)胞與SP2／0小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，用間接ELISA篩選獲得7株高親和力的抗STKl多肽的單克隆抗體，用于制備包被抗體：D抗Raft細(xì)胞TKl抗原蛋白單克隆抗體的制備：方法如C，獲得3株高親和力的Raji細(xì)胞TKl抗原蛋白單克隆抗體，用于制備檢測(cè)抗體：2抗體鑒定通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行小規(guī)模的腹水生產(chǎn)，用蛋

4、白質(zhì)A親合柱從每個(gè)腹水樣本中分離純化單克隆抗體，經(jīng)ELISA、免疫印跡法鑒定單克隆抗體效價(jià)、特異性、親和力以及種屬交叉反應(yīng)，最后用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行抗體生產(chǎn)。二制作STKl酶促化學(xué)發(fā)光試劑盒1抗體配對(duì)將7株高親和力的抗STKl多肽的單克隆抗體和3株高親和力的Raft細(xì)胞TKl抗原蛋白單克隆抗體配對(duì)，用ELISA進(jìn)行測(cè)試。2標(biāo)記抗體使用辣根過(guò)氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)標(biāo)記檢測(cè)抗體。3化學(xué)發(fā)光法試劑盒工作

5、參數(shù)的確定以魯米諾、對(duì)一2甲苯酚、吐溫20為化學(xué)發(fā)光底物；經(jīng)比較確定包被抗體和檢測(cè)抗體的稀釋度；包被抗體即用稀釋的抗體加在酶標(biāo)板上40C溫育過(guò)夜，之后洗滌，干燥過(guò)夜，用透明膠帶封存。4試劑盒技術(shù)參數(shù)的測(cè)定即靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性、特異性、相關(guān)性測(cè)定。結(jié)果通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到靈敏度高的10株抗體，它們是Antip一1—1A9；Anfip一1—3D3；Antip1485；Antip1—4D3；Antip一1—4F7；Antip一2—287；