鹽酸克侖特羅單克隆抗體免疫檢測試劑盒研制.pdf

1、[目的】通過鹽酸克倫特羅抗原的合成和單克隆抗體的研制，建立鹽酸克倫特羅的間接酶聯(lián)免疫檢測方法并研制鹽酸克倫特羅檢測試劑盒。 [方法】 鹽酸克倫特羅抗原的合成和單克隆抗體的研制：用重氮化法將鹽酸克倫特羅(CL)分子與載體蛋白偶聯(lián)，分別制備免疫抗原和包被抗原；以免疫抗原免疫Balb／c小鼠，并取其脾細胞與骨髓瘤細胞(SP2／0)融合制備雜交瘤細胞，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法篩選能分泌鹽酸克倫特羅單克隆抗體的雜交瘤

2、細胞；篩選的雜交瘤細胞接種實驗動物制備鹽酸克倫特羅抗體，通過靈敏度試驗以及單抗與四環(huán)素、沙丁胺醇、腎上腺素等結(jié)構(gòu)類似物交叉反應試驗篩選出高靈敏度和高特異性的CL單抗。 鹽酸克倫特羅間接競爭ELISA檢測試劑盒的研究：以重氮化法將鹽酸克倫特羅與卵清蛋白偶聯(lián)制備包被抗原(CL-OVA)；以鹽酸克倫特羅作為競爭的半抗原，與定量的抗克倫特羅單克隆抗體反應，通過對包被抗原濃度、抗CL-McAb工作濃度、酶標二抗的工作濃度等反應條件優(yōu)化試驗

3、，建立鹽酸克倫特羅間接競爭ELISA檢測方法并研制克倫特羅快速檢測試劑盒；經(jīng)樣品加標回收試驗和進口試劑盒的比對試驗，研究其可行性。 [結(jié)果】 (1)通過實驗分離得到3株特異性分泌鹽酸克侖特羅的細胞株，編號分別為CL-2F12，CL-3C3，CL-4F3，經(jīng)特異性試驗篩選出無交叉反應CL-3C3細胞株；抗CL單抗3C3的敏感性試驗表明，在CL濃度為0．1．10ng／mL間，F(xiàn)一0．9961，具有良好的相關(guān)性。 (2

4、)通過研究建立了鹽酸克倫特羅競爭ELISA檢測方法并研制了檢測試劑一盒，線性范圍為0．05—12．5ng／mL，最小檢測量為0．1ng／mL，批內(nèi)和批間的變異系數(shù)分別為2．84％和5．92％，平均回收率為83．45％，靈敏度為0．95，曲線方程Y=0．4923-0．34481gX，F(xiàn)一0．9939；對540份臨床送檢陽性樣本進行檢測，與進口試劑盒(荷蘭E-D)比較，陽性樣品再用GC-MS確認，兩者陽性符合率為96．39％。 [結(jié)