抗雙氯青霉素單克隆抗體制備與ELISA方法的建立.pdf

1、雙氯青霉素(dicloxacillin，Dx)屬β-內酰胺類青霉素，該類抗生素是歷史最悠久的抗微生物藥物之一，同時也是最大和最重要的一類抗生素。其作用機制是通過抑制細菌黏肽轉肽酶的活性來阻斷細胞壁的形成從而呈現(xiàn)殺菌活性，主要用于抑制革蘭氏陽性菌感染。這類藥物因其耐酶、耐酸、廣譜和長效而被廣泛應用，但由于其有致敏反應和產(chǎn)生細菌耐藥性等負作用，許多國家對動物使用β-內酰胺類抗生素和食品殘留進行了嚴格監(jiān)控。為了建立一種能快速且有效監(jiān)測動物源性

2、食品中DX的殘留方法，本研究采用碳化二亞胺法，將DX與牛血清白蛋白偶聯(lián)制備免疫原，免疫Balb/c小鼠，取免疫小鼠的脾細胞與Sp2/0骨髓瘤細胞融合，間接ELISA篩選，獲得1株可穩(wěn)定分泌mAb的雜交瘤細胞5D4-C9-C8，并對該mAb進行了性質鑒定及抗體應用作了初步研究。 該mAb用間接ELISA方法鑒定結果為：抗體屬于IgG<,1>亞類；與其結構類似物鄰氯青霉素、苯唑青霉素的交叉反應率分別為17.6％和26.1％，與芐青霉

3、素、羥氨芐青霉素和氨芐青霉素均無交叉反應性；細胞上清抗體效價為1:300，腹水效價為1:3.5×10<'5>；秋水仙素阻抑法計數(shù)細胞染色體數(shù)平均為96，體外傳代培養(yǎng)和凍存復蘇后分泌抗體穩(wěn)定。 以5D<,4>-C9-C8單抗為基礎，建立了間接競爭性抑制ELISA方法，該方法對雙氯青霉素最低檢出量為2ng，牛奶及肌肉組織添加回收率為73.6％到120.9％。 與其它方法綜合對照最低檢出量、效率、精確度、費用等參數(shù)可得出用EL