調控黃山黑雞肌肉中多不飽和脂肪比率的關鍵基因鑒定及功能驗證.pdf

1、脂肪酸的含量、比例及種類對改善雞肉品質及風味起著重要作用。明確脂肪酸在家禽體內代謝的規(guī)律和分子調控機制能夠為改善雞肉品質提供新的依據。本試驗以3只具有極端高多不飽和脂肪酸比率和3只極端低多不飽和脂肪酸比率黃山黑雞腿肌組織為試驗材料，進行轉錄組測序分析以找出差異基因。整合差異表達基因、已報道的影響雞肉脂肪酸代謝的數量性狀基因座(Quantitative trait loci，QTL)及基因的生物學功能分析，得到10個影響肌肉中多不飽和脂肪

2、酸含量的候選基因。其中，將脂肪酸脫氫酶2(Fatty acid desaturase2，F(xiàn)ADS2)基因作為后續(xù)的關鍵候選基因進行驗證。通過構建FADS2基因的RNA干擾慢病毒表達載體，并在分離的雞原代前脂肪細胞上鑒定其沉默效率，篩選出有效干擾序列，同時利用RNA干擾技術探討了FADS2基因對19個脂肪酸代謝關鍵功能基因表達的影響及調控脂肪酸代謝機理。主要結果如下
　　(1)脂肪酸含量檢測:通過對20個樣品的脂肪酸組成進行檢測，挑

3、選出3只具有極端高多不飽和脂肪酸比率(0.324、0.329、0.324)和3只極端低多不飽和脂肪酸比率(0.285、0.261、0.265)黃山黑雞腿肌組織為試驗材料(P＜0.01)。
　　(2)轉錄組測序篩選關鍵基因:通過轉錄組測序，本研究發(fā)現(xiàn)了274個差異表達的基因。GO和KEGG分析表明，差異表達基因富集的生物過程主要參與不飽和脂肪酸的合成、脂肪酸代謝和細胞連接等相關的途徑。綜合分析差異表達基因與以往報道的QTL表明FAD

4、S2，DCN,FRZB，OGN,PRKAG3，LHFP,CHCHD10,CYTL1，F(xiàn)BLN5和ADGRD1是影響黃山黑雞肌肉中多不飽和脂肪酸比率的關鍵基因。
　　(3)關鍵基因的功能驗證:試驗以雞FADS2基因mRNA序列作為干擾靶點，設計3組靶向FADS2的小干擾RNA(siRNA)。FADS2-siRNA慢病毒重組質粒侵染雞前脂肪細胞篩選出FADS2-siRNA F1組沉默效果達60％。構建FADS2基因穩(wěn)定下調的雞前脂肪細

5、胞模型。FADS2基因被沉默后，ELOVL5,FADS1，ACACA，ACSL1，LPL，PPARG,LPIN1，ADFP,XDH,PLIN2，ACOX1等脂肪酸代謝相關基因的上調量分別為14.91％,24.59％,54.56％,29.59％,39.57％,11.55％,45.94％,67.56％,195.49％,67.55％,31.62％;ELOVL6,ACLY,CD36,ACSS2,SREBF1,INSIG1,GPAM,PNPLA2