雞與鵪鶉屬間雜交種胚胎肌肉組織發(fā)育相關基因的篩選.pdf

1、脊椎動物肌纖維類型和數(shù)量主要由遺傳因素決定，肌肉組織中的肌纖維在胚胎期已經(jīng)形成了，出生后其肌纖維數(shù)不再改變，肌肉生長主要依賴肌衛(wèi)星細胞的增殖分化導致的肌纖維長度增加和周徑增大，而非細胞的增生或肌細胞數(shù)目的增多。即肌肉的早期發(fā)育是動物的產(chǎn)肉潛力及肌肉品質的關鍵，其發(fā)育狀況直接決定動物的肉產(chǎn)量和質量。家雞是研究肌肉發(fā)育調控過程中非常好的動物模型，蛋雞和肉雞在骨骼肌生長速率上存在顯著差異。雞與鵪鶉屬間雜交，其屬間雜交種具有雙親的肉品質特點，且

2、基因及相關性狀發(fā)生分離和重新組合的現(xiàn)象，適合作為肉品質研究的一種生物學模式生物。
　　 本研究分別選用肉用種公雞和蛋用種公雞當做父本，朝鮮鵪鶉當做母本進行雞與鵪鶉屬間雜交，通過人工受精、孵化、采樣等一系列過程，共收集獲得了19個13日齡肉用型屬間雜交種胚胎肌肉組織和21個13日齡蛋用型屬間雜交種胚胎肌肉組織用于抑制性消減雜交實驗，其可以明確揭示肌肉發(fā)育基本規(guī)律。
　　 以肉用型公雞當做父本，鵪鶉當做母本的雞與鵪鶉屬間雜交

3、種胚胎肌肉組織和蛋用型公雞當做父本，鵪鶉當做母本的雞與鵪鶉屬間雜交種胚胎肌肉組織為實驗組和對照組，利用抑制性消減雜交技術，進行了正向抑制性消減雜交，成功構建了肌肉發(fā)育相關的消減文庫。藍白斑實驗獲得180個克隆菌落，利用Nested Primer 2R和Nested Primer 1為引物對每個克隆進行了PCR檢測，篩選重組克隆并鑒定插入片段的大小，棄陰性克隆和PCR產(chǎn)物為多條帶的克隆，最后從消減cDNA質粒文庫中篩選到140個有效陽性克